分子鉴定2种猪食道口线虫熔解曲线分析试验的建立

›› 2013, Vol. 40 ›› Issue (9): 70-74.

分子鉴定2种猪食道口线虫熔解曲线分析试验的建立

舒丽^1,2, 程田¹, 翁亚彪¹, 林瑞庆¹, 邹尚书¹

1. 华南农业大学兽医学院, 广东广州 510642;
2. 四川省富顺县永年镇兽医站, 四川富顺 643200

收稿日期:2013-03-01 出版日期:2013-09-20 发布日期:2013-09-18
通讯作者: 林瑞庆 E-mail:rqlin@scau.edu.cn
作者简介:舒丽(1987-),女,湖南人,硕士生,研究方向:兽医寄生虫学。
基金资助:
教育部"长江学者和创新团队发展计划"创新团队项目(IRT0723);广东省高等学校大学生创新实验项目。

Establishment of Melting Curve Analysis Assay for Molecular Identification of Oesophagostomum spp. from Pigs

SHU Li^1,2, CHENG Tian¹, WENG Ya-biao¹, LIN Rui-qing¹, ZOU Shang-shu¹

1. College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China;
2. Fushun Yongnian Veterinary Station, Fushun 643200, China

Received:2013-03-01 Online:2013-09-20 Published:2013-09-18

摘要/Abstract

摘要： 基于猪有齿食道口线虫和四棘食道口线虫IGS rDNA序列的遗传变异情况,于种内保守、种间差异明显的序列片段设计1对引物,建立了区分2种猪食道口线虫的熔解曲线分子鉴定方法。研究结果显示,该方法可通过熔解曲线差异而准确鉴定猪食道口线虫2个种,与其他线虫和吸虫无交叉反应,特异性良好;能检测猪食道口线虫单虫卵样品和FTA卡片的DNA模板。该研究为猪食道口线虫种类准确鉴定提供了一种新的准确、敏感、特异且快速的分子手段。

关键词: 有齿食道口线虫; 四棘食道口线虫; 熔解曲线分析; 分子鉴定

Abstract: Based on the IGS rDNA sequences of O.dentatum and O.quadrispinulatum, a pair of primers (MCF/MCR) was designed for developing a melting curve analysis assay for the identification and differentiation of two Oesophagostomum species. This assay allowed the specific identification and differentiation of O.dentatum and O.quadrispinulatum by melting curve analysis, with no amplicons being amplified from heterogenerous DNA samples. DNA sequencing confirmed the identity of the amplified products. The single egg of Oesophagostomum spp. and DNA extracted using What-man FTA card could also be detected by this assay. These findings showed that the melting curve analysis assay established was accurate, sensitive, specific and rapid, allowing the detection and identification of O.dentatum and O.quadrispinulatum from pigs.

Key words: Oesophagostomum dentatum; Oesophagostomum quadrispinulatum; melting curve analysis; molecular identification

中图分类号:

S852.72

舒丽, 程田, 翁亚彪, 林瑞庆, 邹尚书. 分子鉴定2种猪食道口线虫熔解曲线分析试验的建立[J]. , 2013, 40(9): 70-74.

SHU Li, CHENG Tian, WENG Ya-biao, LIN Rui-qing, ZOU Shang-shu. Establishment of Melting Curve Analysis Assay for Molecular Identification of Oesophagostomum spp. from Pigs[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2013, 40(9): 70-74.

参考文献

1 刘翠权, 卢景. 玉林部分猪场消化道线虫感染状况调查[J]. 广西畜牧兽医学报, 2002, 18(6): 11~12.
2 齐哲,张伟,刘卫华,等. FTA滤膜与环介导等温扩增技术结合快速检测消毒乳中的蜡样芽孢杆菌[J].中国食品学报,2009,9(3): 156~161.
3 阮正祥,王勤,曾志明, 等. 贵州省毕节地区猪寄生虫区系调查[J]. 中国兽医寄生虫病, 2002, 10(3): 17~18.
4 李慧,张会彦, 马晓燕, 等. 改良FTA-PCR快速检测单核细胞增生李斯特氏菌研究[J]. 食品科学, 2009, 12(6): 196~198.
5 汪明.兽医寄生虫学[M]. 第3版. 北京: 中国农业出版社, 2008.
6 张守发,于龙政, 刘冰. FTA纸片中保存的马巴贝虫DNA的PCR检测[J]. 中国兽医科学, 2006, 36(8): 647~649.
7 周文忠, 周家富, 毕朝安, 等. 玉溪市仔猪肠道寄生虫的调查[J]. 中国兽医寄生虫病, 2001, 9(3): 24~25.
8 荆安, 李铭,王领先, 等. 江津市猪寄生虫区系调查[J]. 中国兽医寄生虫病, 2002, 10(2): 24~25.
9 班付国,刘宏伟,高延玲,等. 运用SYBR Green Ⅰ熔解曲线法检测饲料中牛、羊源性成分的研究[J]. 中国畜物兽医,2011,38(2): 128~131.
10 黄燕,张龙现,李晓虹,等. FTA卡片PCR法检测果汁饮料中卡耶他环孢子虫技术的建立[J]. 中国动物传染病学报, 2010, 18(1): 59~63.
11 鲁巧云,余进,刘伟,等. FTA-DNA直接提取法在病原真菌分子鉴定中的应用[J]. 中国真菌学杂志, 2010, 5(3): 137~140.
12 Boes J, Willingham A L, Shi F H, et al. Prevalence and distribution of pig helminths in the Dongting Lake region (Hunan province) of the People's Republic of China[J]. J Helminthol, 2000, 74(1): 45~52.
13 Gasser R B, Woods W G. Distinguishing Oesophagostom dentatum from Oesophagostom quadrispinulatum developmental stages by a single strand conformation polymorphism method[J]. Int J Parasitol, 1999, 28(12): 1903~1909.
14 Lin R Q, Ai L, Zou F C, et al. Multiplex PCR tool for the specific identification of Oesophagostomum spp.from pigs [J]. Parasitol Res, 2008, 103(4): 993~997.
15 Reed G H, Witter C T. Sensitivity and specificity of single nucleotide polymorphism scanning by high resolution melting analysis[J]. Cline Chem, 2004, 50(10): 1478~1454.
16 Weng Y B, Hu Y J, Li Y, et al. Survey of intestinal parasites from intensive pig farms in Guangdong province, People's Republic of China[J]. Vet Parasitol, 2005, 127(3~4): 333~336.

[1]	宋胜男, 郭嘉, 杨翌承, 桑春丽, 杨梅花, 王远志. 石河子地区宠物犬蜱的种类鉴定及其携带布鲁氏菌的检测[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(5): 1717-1724.
[2]	夏晨阳, 石斌, 唐文强, 单曲拉姆, 贾万忠, 白吉, 吴燕涛, 闫鸿斌, 刘建枝. 西藏牦牛、绵羊棘球蚴病病原的分子鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(4): 1209-1215.
[3]	吕继洲, 赵丽, 赵昱林, 韩雪清, 王慧煜, 吴绍强. 拉合尔钝缘蜱的形态学及分子生物学鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(4): 1149-1158.
[4]	吕继洲, 王振宝, 袁向芬, 吴绍强. 草原革蜱和边缘革蜱的分子生物学鉴定[J]. , 2013, 40(9): 8-15.
[5]	刘自增, 吴周良, 阎萍, 王一文. 高分辨率熔解曲线分析应用的研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2013, 40(8): 105-111.
[6]	扎西卓玛, 郭宪, 阎萍, 吴晓云, 王宏博, 刘建, 杨安圈, 张德虎, 王照忠, 王成林, 完马单智, 诺科加, 杨应川. 高分辨率熔解曲线分析法检测牦牛脂蛋白脂酶外显子7的多态性及与生长性状相关性分析[J]. , 2013, (7): 84-88.
[7]	吕继洲, 吴绍强, 张永宁, 王振宝, 冯春燕, 王彩霞, 邓俊花, 袁向芬, 林祥梅. 小亚璃眼蜱、亚洲璃眼蜱和残缘璃眼蜱的分子生物学鉴定[J]. , 2013, 40(6): 7-14.
[8]	赵云英, 张燕欣, 张文生, 李富桂. 一株鸡传染性法氏囊病病毒的分离鉴定[J]. , 2012, 39(6): 207-211.
[9]	陈文承;徐平源;李芬;刘伟;刘毅. 蛇四棘食道口线虫线粒体cox1 基因的克隆及序列分析[J]. , 2011, 38(4): 113-116.