Q热贝纳柯克斯体SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

›› 2013, Vol. 40 ›› Issue (7): 18-21.

Q热贝纳柯克斯体SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

贾广乐, 王晓楠, 廖娟红, 林祥梅

中国检验检疫科学研究院, 北京 100121

修回日期:2013-01-15 出版日期:2013-07-20 发布日期:2013-07-24
作者简介:贾广乐(1973-),男,山西人,博士,副研究员,主要从事动物检疫研究。
基金资助:
动物Q热检疫技术及标准研究(201110247)。

Establishment of SYBR GreenⅠ Fluorescent Quantitative PCR Detection Method for Coxiella bumetii Q Fever

JIA Guang-le, WANG Xiao-nan, LIAO Juan-hong, LIN Xiang-mei

Chinese Academy of Inspection and Quarantine, Beijing 100121, China

Revised:2013-01-15 Online:2013-07-20 Published:2013-07-24

摘要/Abstract

摘要： 根据Q热贝纳柯克斯体(Coxiella burnetii)插入序列IS1111序列设计引物,建立快速检测Q热的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,该方法能检测出10²个拷贝数的阳性质粒。标准曲线相关系数为0.991,扩增效率为98%。对结核分支杆菌、衣原体、布鲁氏杆菌及牛血液的核酸样品的特异性检测结果均为阴性。结果表明本研究建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR法灵敏度高且特异性好,可用于临床检测。

关键词: Q热; 贝纳柯克斯体; 荧光定量PCR; SYBR Green Ⅰ染料法

Abstract: Primers were designed based on insert sequence IS1111 of Coxiella bumetii of Q fever, SYBR GreenⅠReal-time quantitative PCR assay was developed for indentification of Q fever. The recombinant plasmid containing the target sequence was constructed to detect the sensitivity and prepare the standard curve. The method could detect 10² of the plasmid copy numbers.Related coefficient was 0.991 of the standard curve,the amplification efficiency was 98%.The results of specific detection of nucleic acid sample for M.tuberculosis,Chlamydia,Brucella and bovine blood were negative. SYBR GreenⅠfluorescent quantitative PCR method developed in this study had high Brucella sensitivity and specificity,and could be used for clinical test.

Key words: Q fever; Coxiella burnetii; Real-time quantitative PCR; SYBR GreenⅠdye method

中图分类号:

贾广乐, 王晓楠, 廖娟红, 林祥梅. Q热贝纳柯克斯体SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立[J]. , 2013, 40(7): 18-21.

JIA Guang-le, WANG Xiao-nan, LIAO Juan-hong, LIN Xiang-mei. Establishment of SYBR GreenⅠ Fluorescent Quantitative PCR Detection Method for Coxiella bumetii Q Fever[J]. , 2013, 40(7): 18-21.

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