猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株膜基质蛋白单克隆抗体的研制

›› 2009, Vol. 36 ›› Issue (11): 70-73.

猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株膜基质蛋白单克隆抗体的研制

王元^1,2，胡鸿惠^2，3，秦亚曼²，张倩²，邓小雨²，曹振²，王传彬²，冉多良¹，田克恭^2

（1.新疆农业大学动物医学院，乌鲁木齐 830052；2.中国动物疫病预防控制中心，北京 100193；3.中国农业大学动物医学院，北京 100193）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-11-20 发布日期:2009-11-20
通讯作者: 曹振

Development of Monoclonal Antibodies against Matrix Protein ofPRRSV NVDC-JXA1 Strain

WANG Yuan^1，2， HU Hong-hui^2，3， QIN Ya-man²， ZHANG Qian²， DENG Xiao-yu²，CAO Zhen²， WANG Chuan-bin²， RAN Duo-liang¹， TIAN Ke-gong^2

（1.College of Veterinary Medicine，Xinjiang Agricultural University，Urumqi 830052，China；2.China Animal Disease Control Center，Beijing 100193，China；3.College of Veterinary Medicine，China Agricultural University，Beijing 100193）

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-11-20 Published:2009-11-20
Contact: CAO Zhen

摘要/Abstract

摘要： 为制备抗猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株单克隆抗体，用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株免疫BALB/c小鼠，最后一次免疫后第3天取其脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光试验（IFA）筛选，以有限稀释法克隆3次，制备单克隆抗体，并对制备的单克隆抗体进行鉴定。结果表明获得了2株分泌PRRSV膜基质蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞，命名为1D12、5H5，经鉴定其抗体亚型分别为IgG2b、IgM，2株均为κ链，腹水ELISA效价分别为1∶107和1∶105。该单克隆抗体与PRV、PPV、PCV、CSFV、JEV无交叉反应。作者成功制备了抗猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株膜基质蛋白单克隆抗体，为进一步建立相关诊断方法奠定了基础。

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒; 单克隆抗体; 膜基质蛋白

Abstract: To develop and characterize monoclonal antibody (McAb) against porcine reproductive and respiratory syndrome virus NVDC-JXA1 strain (PRRSV NVDC-JXA1 strain) for related research work.BALB/c mice were immunized conventionally with the purified virions of PRRSV NVDC-JXA1 strain.On the third day after the final immunization，spleen cells of mice fused with myeloma cells SP2/0 were filtered by culturing selectively，diluting finitely，enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and IFA test，to obtain the subtypes from the clone line by ELISA test.As a result，the cell lines secreted McAbs stably by culturing in vitro and recovery tests were obtained and named as 1D12，5H5 respectively，the ELISA titers of ascites was 1∶107，1∶105 respectively.The subtypes of the two McAbs were identified as IgG2b and IgM，Kappa light chain.The two McAbs reacted specifically with only matrix protein of PRRSV but not with PRV，PPV，PCV，CSFV，JEV by indirect-ELISA.The McAbs will be very useful as specific reagents in diagnosis and control of PRRS.

Key words: PRRSV; monoclonal antibody; matrix protein

中图分类号:

S852.65⁺9.6

王元;胡鸿惠;秦亚曼;张倩;邓小雨;曹振;王传彬;冉多良;田克恭. 猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株膜基质蛋白单克隆抗体的研制[J]. , 2009, 36(11): 70-73.

WANG Yuan;HU Hong-hui;QIN Ya-man;ZHANG Qian;DENG Xiao-yu;CAO Zhen;WANG Chuan-bin;RAN Duo-liang;TIAN Ke-gong. Development of Monoclonal Antibodies against Matrix Protein ofPRRSV NVDC-JXA1 Strain[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2009, 36(11): 70-73.

[1]	王小格, 司煊瑛, 闫志伟, 王飞, 尤龙琪, 刘梗, 蔡茂, 梁珺珹, 梁玉秀, 杜永坤, 张改平. 非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(2): 781-791.
[2]	李松倍, 谢永生, 龙晓琴, 张晓晓, 陈永杰, 张春红, 焦茂兴, 郭春和. 2023年华南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传变异分析[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(1): 331-340.
[3]	韩凤烨, 刘莹, 潘晨帆, 张乾义, 陈小云, 朱真, 印春生, 温永俊, 王凤雪, 杜吉革. 产气荚膜梭菌Alpha毒素突变体的表达及单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(1): 442-450.
[4]	程晶, 陈沛霖, 郭禹, 崔锦蔷, 江波, 周林宜, 刘文晓, 李焕荣, 李永清. 牛早幼粒细胞白血病蛋白的原核表达及单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(9): 4014-4024.
[5]	于晶雪, 韦珊珊, 覃绍敏, 吴健敏, 杨丽华, 陈凤莲, 许力士, 秦树英, 华俊, 韦珏, 方芳, 刘金凤. 基于CRISPR/Cas12a-RT-RAA的猪繁殖与呼吸综合征病毒快速检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(8): 3237-3246.
[6]	乔常宏, 陈晶, 罗琴, 刘宝玲, 何振文, 刘丁语, 陈翔宇, 王晓虎, 王刚, 白挨泉, 蔡汝健. 猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导的炎症反应及抗炎药物研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(8): 3528-3539.
[7]	董泽霞, 林鑫, 周期律, 王楠, 黄雷, 刘志国, 冯政, 牟玉莲. CD163基因敲除iPAMs的构建及其感染PRRSV的特征分析[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(8): 3471-3483.
[8]	崔锦蔷, 程晶, 江波, 周林宜, 刘文晓, 李永清, 宋勤叶. 鸡γ-干扰素的原核表达及其单克隆抗体制备与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(7): 3008-3019.
[9]	鲜钰涵, 冯宏盛, 高永宇, 李海洋, 杨思宇, 桑辰君, 曹玉蝶, 唐越, 李子彬, 高凤山. 猪源病毒细胞毒性T淋巴细胞表位研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(7): 3086-3099.
[10]	付明智, 李新新, 刘雪威, 李焕荣. 猪源分泌性白细胞蛋白酶抑制因子的原核表达及单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(6): 2556-2565.
[11]	罗琴, 刘宝玲, 乔常宏, 陈翔宇, 刘丁语, 王晓虎, 王刚, 刘昊, 蔡汝健. 脂质代谢和糖代谢在PRRSV感染宿主细胞中作用研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(4): 1686-1695.
[12]	杨大为, 刘书怡, 蔺雅婷, 陈虎, 张洪亮, 李桂梅. 猪伪狂犬病病毒gB蛋白单克隆抗体的制备及竞争ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(12): 5439-5448.
[13]	曹梦瑶, 王晶, 周林宜, 程晶, 李永清, 许健, 江波, 胡格. 抗鸡早幼粒细胞白血病蛋白单克隆抗体的制备及其在荧光检测中的应用[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(10): 4500-4509.
[14]	王慧, 冯保亮, 向光明, 黄雷, 刘志国, 李奎, 牟玉莲. CD163单等位基因表达的iPAMs细胞系的构建及其介导PRRSV感染的特征分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(7): 2617-2628.
[15]	马天天, 张亚楠, 冯亚文, 岳怀宁, 王亚文, 苏恺, 袁晨, 逯纪成, 孙泰然, 薛文阁, 宋勤叶. 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(7): 2832-2842.