鹅细小病毒VP3基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达

《中国畜牧兽医》---唯一指定的官方网站

鹅细小病毒VP3基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达

王志强，李洪彬，杨旭东，黄宇翔，邹跃，张军，刘力威

（黑龙江省兽医科学研究所，黑龙江齐齐哈尔 161006）

修回日期:2014-09-20 出版日期:2014-09-20 发布日期:2014-09-24
通讯作者: 刘力威（1963—），女，研究员。 E-mail：llw999@yeah.net
作者简介:王志强（1977—），女，黑龙江人，硕士，助理研究员，研究方向：禽类病毒病。
基金资助:
黑龙江省财政厅省属科研院所自拟专项基金。

Expression of Goose Parvovirus VP3 Gene in Baculovirus Expression System

WANG Zhi-qiang，LI Hong-bin，YANG Xu-dong，HUANG Yu-xiang，ZOU Yue，ZHANG Jun，LIU Li-wei

(Veterinary Science Research Institute of Heilongjiang Province，Qiqihar 161006，China)

Revised:2014-09-20 Online:2014-09-20 Published:2014-09-24

摘要/Abstract

摘要： 为真核表达鹅细小病毒（GPV）融合蛋白VP3基因，本研究通过PCR扩增GPV FY89株VP3基因，并将其克隆至杆状病毒转移载体pFastBac/HBM-TOPO中，经双酶切、PCR及测序鉴定正确后，转化感受态细胞DH10Bac，提取重组杆状病毒穿梭质粒rBacmid-VP3，将经PCR鉴定正确的rBacmid-VP3转染Sf9昆虫细胞，连续传代后，细胞病变明显。SDS-PAGE分析结果表明成功表达了分子质量约为61 ku的VP3蛋白；Western blotting分析结果表明重组VP3蛋白具有良好的抗原性。

关键词: 鹅细小病毒; VP3基因; 杆状病毒表达系统

Abstract: The fusion VP3 gene sequence of goose parvovirus (GPV) was amplified by PCR using a pair of specific primers from GPV FY89 strain.The PCR product was cloned into pFastBac/HBM-TOPO vector and transformed into DH10Bac cells.Recombinant Bacmid-VP3 was transfected into Sf9 insect cells，and a fusion protein about 61 ku was expressed and identified by SDS-PAGE analysis.The antigenicity of the recombinant VP3 protein was confirmed by Western blotting.

Key words: goose parvovirus (GPV); VP3 gene; baculovirus expression system

中图分类号:

Q785

王志强，李洪彬，杨旭东，黄宇翔，邹跃，张军，刘力威. 鹅细小病毒VP3基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达[J]. 《中国畜牧兽医》---唯一指定的官方网站.

WANG Zhi-qiang，LI Hong-bin，YANG Xu-dong，HUANG Yu-xiang，ZOU Yue，ZHANG Jun，LIU Li-wei. Expression of Goose Parvovirus VP3 Gene in Baculovirus Expression System[J]. .

参考文献

1 王彬，孙德君，柴华，等.小鹅瘟病毒H株VP3基因序列分析[J].中国畜牧兽医，2010，37（10）：155～158.
2 布日额，李宝臣，马波，等.应用GPV VP3基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法研究[J].畜牧兽医学报，2006， 37（2）：199～203.
3 田芳华，程相朝，张春杰，等.以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体的重组NDV-HN口服疫苗的构建与鉴定[J].中国畜牧兽医，2013，40（11）：59～62.
4 邢军，刘文天，李艳芸，等.现代分子生物学实验手册[M].第2版.北京：科学出版社， 2008.
5 殷震，刘景华.动物病毒学[M].第2版.北京：科学出版社，1997.
6 葛晨霞，王龙涛，张加力，等.小鹅瘟的PCR诊断及病理观察[J].中国畜牧兽医，2010，37（12）：210～211.
7 靳立明，张春雷，廖明，等.表面展示猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组杆状病毒的构建与鉴定[J].中国畜牧兽医，2013，40（7）：6～9.
8 Bai B，Lu X，Meng J，et al.Vaccination of mice with recombinant baculovirus expressing spike or nucleocapsid protein of SARS-like coronavirus generates humoral and cellular immune responses[J].Mol Immunol，2008，45（4）：868～875.
9 Cheng T，Xu C Y，Wang Y B，et al.Rapid and efficient method to express target genes in mammalian cells by baculovirus[J].World J Gastroenterol，2004，10（11）：1612～1618.
10Davies A H.Current methods for manipulating baculoviruses[J].Biotechnology（NY），1994，12（1）：47～50.
11 Fan H，Pan Y，Fang L，et al.Construction and immunogenicity of recombinant pseudotype baculovirus expressing the capsid protein of porcine circovirus type 2 in mice[J].J Virological Methods，2008，150：21～26.
12 Jones I，Morikawa Y.Baculovirus vectors for expression in insect cells[J].Curr Opin Biotechnol，1996，7（5）：512～516.
13 Nakhai B，Pal R，Sridhar P，et al.The alpha subunit of human chorionic gonadotropin hormone synthesized in insect cells using a baculovirus vector is biologically active[J].FEBS Lett，1991，283（1）：104～108.
14 Zadori Z，Judith E，Nagy J，et al.Characteristics of the genome of goose parvovirus[J].Avian Path，1994，23（2）：359～364.
15 Zadori Z，Stefancsik R，Rauch T，et al.Analysis of the complete nucleotide sequences of goose and Muscovy duck parvoviruses indicates common ancestral origin with adenoassociated virus 2[J].Virology，1995，212（2）：562～573.

[1]	段香媛, 武江利, 魏俏红, 冯毛. 蜂王浆主蛋白2在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3779-3786.
[2]	李双星, 刘业兵, 柳方远, 吉婧, 杜吉革, 李倩琳, 朱真, 李启红, 陈小云, 印春生. 猫传染性腹膜炎病毒N蛋白在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(1): 273-279.
[3]	王盛, 谢芝勋, 沈文康, 谢丽基, 范晴, 罗思思, 张艳芳, 曾婷婷, 黄娇玲, 张民秀, 谢志勤, 邓显文. 禽呼肠孤病毒σB和σC蛋白在昆虫细胞中的共表达[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(5): 1334-1341.
[4]	何海健, 吴瑗, 王鲁彦, 李群景, 巴少波, 石林, 邵春艳, 孙静, 姜胜, 王晓杜. PEDV分离株S1基因的重组杆状病毒真核表达[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(3): 832-839.
[5]	陈美荣, 林伟东, 宋天琪, 鑫婷, 郭晓宇, 黄克和, 贾红. CDV强毒BJ16B2株H基因在昆虫杆状病毒中的表达与鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》, 2018, 45(8): 2041-2048.
[6]	戴银, 张丹俊, 赵瑞宏, 胡晓苗, 沈学怀, 侯宏艳, 潘孝成, 周学利. 鹅细小病毒安徽分离株NS和VP基因的克隆及序列分析[J]. 《中国畜牧兽医》, 2018, 45(5): 1177-1183.
[7]	吴靖, 许健, 黄秀芬, 沈俊俊, 何后军, 李永清. 抗牛传染性鼻气管炎病毒囊膜gD糖蛋白的单链抗体在昆虫细胞中表达及活性检测[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(8): 2475-2482.
[8]	吴植, 张继玲, 吴萌, 崔潇婷, 王安平. 输卵管特异表达人溶菌酶基因重组禽腺联病毒的构建及鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(10): 2871-2877.
[9]	郭慧娟, 樊翠, 张英, 吕茂杰, 梁武, 杨保收. 猪圆环病毒2型CAP蛋白在flashBAC杆状病毒表达系统中的表达与鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》---唯一指定的官方网站, 2016, 43(7): 1876-1883.
[10]	朱新产, 王倩文, 朱峰伟, 李洪强. 鹅细小病毒感染雏鹅血液的蛋白/酶活性及同工酶变异性研究[J]. , 2016, 43(2): 413-422.
[11]	朱新产, 张兆斌, 黄云鸽, 杨丽金. 鹅细小病毒侵染雏鹅组织器官的氧化/脱氢酶及同工酶研究[J]. , 2015, 42(8): 2081-2090.
[12]	万春和, 潘异哲, 陈红梅, 施少华, 傅光华, 程龙飞, 黄瑜. 区别鹅细小病毒和番鸭细小病毒的PCR-RFLP方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(9): 56-59.
[13]	赵文年，王清华，刘春菊，王淑娟，雷程红，包静月，王志亮. 小反刍兽疫病毒Tibet 07株F蛋白在昆虫细胞中的表达及其抗原性鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(8): 29-33.
[14]	刘春菊, 任炜杰, 王志亮. 杆状病毒表达系统在兽用亚单位疫苗领域应用的研究进展[J]. , 2013, 40(9): 101-105.
[15]	靳立明, 张春雷, 廖明, 樊惠英. 表面展示猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组杆状病毒的构建与鉴定[J]. , 2013, 40(7): 6-10.