小反刍兽疫病毒Tibet 07株F蛋白在昆虫细胞中的表达及其抗原性鉴定

中国畜牧兽医

小反刍兽疫病毒Tibet 07株F蛋白在昆虫细胞中的表达及其抗原性鉴定

赵文年¹^，2，王清华^{1，刘春菊¹，王淑娟¹，雷程红²，包静月¹，王志亮¹}

1.中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032；2.新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐 830000

收稿日期:2014-01-14 出版日期:2014-08-20 发布日期:2014-08-22
通讯作者: 包静月。E-mail：baojingyue@cahec.cn 王志亮。E-mail：wangzhiliang@cahec.cn
作者简介:赵文年（1988—），男，新疆人，硕士，研究方向：预防兽医学。王清华（1979—），女，山东人，硕士，研究方向：预防兽医学。赵文年和王清华对本文具有同等贡献，并列为第一作者。
基金资助:
国家自然科学基金项目（31272589）；公益性行业（农业）科研专项经费（201103008）。

Expression and Identification of F Protein of Peste Des Petits Ruminants Virus Strain Tibet 07 in Insect Cells

ZHAO Wen-nian¹^，2, WANG Qing-hua¹, LIU Chun-ju¹, WANG Shu-juan¹, LEI Cheng-hong², BAO Jing-yue¹, WANG Zhi-liang¹

1. China Animal Health and Epidemiology Center, Qingdao 266032,China；2. College of Veterinary Medicine, Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830000, China

Received:2014-01-14 Online:2014-08-20 Published:2014-08-22

摘要/Abstract

摘要： 应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus,PPRV）西藏分离株Tibet 07的融合蛋白，并对其抗原性进行鉴定。扩增PPRV Tibet 07株融合蛋白基因，克隆至pFastBac/CT-TOPO载体中，构建重组穿梭质粒pFastBacCT-PPRV-F，构建重组杆状病毒Bacmid-PPRV-F，转染sf9细胞，获得重组杆状病毒。通过SDS-PAGE鉴定F蛋白的表达，利用Western blotting和间接免疫荧光鉴定F蛋白的抗原性。表达的F蛋白在分子质量约59 ku处可见特异蛋白条带。重组杆状病毒Bacmid-PPRV-F感染的sf9细胞可与抗PPRV阳性血清发生特异性反应。使用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达了PPRV西藏分离株Tibet 07的融合蛋白，为进一步研究其生物学功能及研制小反刍兽疫的亚单位疫苗奠定了基础。

关键词: 小反刍兽疫; F蛋白; 杆状病毒表达系统

Abstract: In order to obtain purified peste des petits ruminants virus F protein, the F gene of peste des petits ruminants virus strain Tibet 07 was cloned into transfer vector pFastBac/CT-TOPO, plasmid pFastBacCT-PPRV-F was then transformed into DH10Bac complement cells. The recombinant bacmid DNA was isolated and transfected into sf9 insect cells to express F protein. The expressed F protein was identified by using SDS-PAGE, Western blotting and indirect immunofluorescence assay. The recombinant F protein was successfully expressed in insect cells with a relative molecular of 59 ku.The sf9 cells infected by Bacmid-PPRV-F can reacted with positive serum of peste des petits ruminants.Using the Bac-to-Bac baculovirus expression system expressed the F protein of peste des petits ruminants virus strain Tibet 07.This work provides basis for development of rapid test for detection of peste des petits ruminants antibody.

Key words: peste des petits ruminants; F protein; baculovirus expression system

赵文年，王清华，刘春菊，王淑娟，雷程红，包静月，王志亮. 小反刍兽疫病毒Tibet 07株F蛋白在昆虫细胞中的表达及其抗原性鉴定[J]. 中国畜牧兽医.

ZHAO Wen-nian, WANG Qing-hua, LIU Chun-ju, WANG Shu-juan, LEI Cheng-hong, BAO Jing-yue, WANG Zhi-liang. Expression and Identification of F Protein of Peste Des Petits Ruminants Virus Strain Tibet 07 in Insect Cells[J]. .

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