丙型副伤寒沙门氏菌脂多糖提取纯化及活性分析

中国畜牧兽医

丙型副伤寒沙门氏菌脂多糖提取纯化及活性分析

杨成兰，罗薇，刘内生，杨阳

(西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都 610041)

收稿日期:2013-09-28 出版日期:2014-04-20 发布日期:2014-05-27
通讯作者: 罗薇（1960—），女，四川人，教授，研究方向：动物传染病的诊断与防治。E-mail:13678006660@163.com
作者简介:杨成兰（1988—），女，湖南人，硕士，研究方向：微生物毒力因子。
基金资助:
四川省应用基础研究计划项目(2013JY0045)。

Extraction,Purification and Activity Analysis of Lipopolysaccharide of Salmonella paratyphi C

YANG Cheng-lan, LUO Wei, LIU Nei-sheng, YANG Yang

(College of Life Science and Technology, Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041, China)

Received:2013-09-28 Online:2014-04-20 Published:2014-05-27

摘要/Abstract

摘要： 为了提取、纯化天鹅源丙型副伤寒沙门氏菌脂多糖（LPS）并检测其活性，试验通过热酚水法提取丙型副伤寒沙门氏菌LPS，采用DNaseⅠ、RNase A和蛋白酶K及醇沉法纯化LPS，测定LPS提取物中多糖、蛋白及核酸的含量，鲎试剂检测凝集活性，显色基质法测定其活性。结果显示，纯化的丙型副伤寒沙门氏菌LPS平均产率为1.48%，多糖含量为3.84%，蛋白含量为1.49%，核酸含量为 5.45%，且核酸片段低于100 bp,SDS-PAGE电泳和银染结果显示条带主要集中在10～15 ku范围内，与2 EU/mL鲎试剂的最小凝集浓度是10.99 ng/mL，显色基质法测定其活性为9.82×10⁵ EU/mg。该试验提取、纯化的丙型副伤寒沙门氏菌LPS纯度较高，生物活性良好。

关键词: 脂多糖; 丙型副伤寒沙门氏菌; 热酚水法; 鲎试剂; 显色基质法

Abstract: This study was to obtain lipopolysaccharide (LPS) from Salmonella paratyphi C and analyze its activity. In this study, LPS was extracted from Salmonella paratyphi C by the hot phenol-water method,and purified with DNaseⅠ, RNase A and proteinase K. The contents of the purified polysaccharose, protein and nucleic acid of the purified LPS were detected, its bioactivity was detected with tachypleus amebocyte lysate (TAL). The results showed that the productivity of the purified LPS was 1.48%, the proportions of the average polysaccharose, protein and nucleic acid were 3.84%, 1.49% and 5.45%. The sequence of nucleic acid was lower than 100 bp. SDS-PAGE and silver stain showed that strip size was approximately 10 to 15 ku, the agglutinate activity of TAL was 10.99 ng/mL. The chromogenic limulus amobocyte lysate assay showed that the activity of LPS was 9.82×10⁵ EU/mg. In conclusion,the purified LPS of Salmonella paratyphi C in this study was with high purity and bioactivity.

Key words: lipopolysaccharide (LPS); Salmonella paratyphi C; hot phenol-water method; tachypleus amebocyte lysate (TAL); chromogenic limulus amobocyte lysate assay

杨成兰，罗薇，刘内生，杨阳. 丙型副伤寒沙门氏菌脂多糖提取纯化及活性分析[J]. 中国畜牧兽医.

YANG Cheng-lan, LUO Wei, LIU Nei-sheng, YANG Yang. Extraction,Purification and Activity Analysis of Lipopolysaccharide of Salmonella paratyphi C[J]. .

参考文献

1 王照娜. 大肠杆菌脂多糖的提取纯化及活性分析［D］. 天津：南开大学, 2008.
2 刘中原, 李延平. 细菌脂多糖的生物活性及作用机制［J］. 医学综述, 2010, 16(2): 166~169.
3 刘红亮, 陈学忠, 李克生,等. 肠出血性大肠杆菌O157∶H7脂多糖抗原的提取鉴定及间接ELISA法的建立［J］. 中国人兽共患病学报, 2011, 27（7）: 637~644.
4 刘晓波, 黄策, 严共华. S minnesota Re菌粗糙型脂多糖的提取纯化及鉴定［J］. 临床检验杂志, 1995, 13(5): 263.
5 宋宏新, 刘晓阳, 李宏. 改良热酚水法制备大肠杆菌O157∶H7脂多糖抗原的研究［J］. 食品科学, 2006, 27(10): 273~275.
6 张志功. 脆弱类杆菌的培养与脂多糖的提取［D］. 长沙: 中南大学, 2006.
7 张艳红, 杜元钊, 吴延功. 肠炎沙门氏菌脂多糖的提取与制备［J］. 基础兽医学, 2001, 22（3）: 79~80.
8 陆承平. 兽医微生物学［M］. 第4版. 北京: 中国农业出版社, 2008.
9 林秋雄, 张莉滟, 单志新, 等. 肝螺杆菌脂多糖提取及纯化方法的建立［J］. 热带医学杂志, 2012, 12（8）: 920~922.
10 胡涛, 王加启, 张养东, 等. 阴外动脉注射脂多糖对奶牛临床症状及白细胞的影响［J］. 中国畜牧兽医, 2011, 38(6): 5~9.
11 徐先栋, 谢珍玉, 王世锋, 等. 脂多糖快速银染检测方法的改良［J］. 生物技术通报, 2009, 3: 95~97.
12 康洁. 3种方法提取大肠杆菌脂多糖的比较［J］. 中国农学通报, 2010, 26(21): 12~15.
13 蒋建新, 姚咏明, 郑江. 细菌内毒素基础与临床［M］. 北京: 人民军医出版社, 2004.
14 Davis M R Jr, Goldberg J B. Purification and visualization of lipopolysaccharide from gram-negative bacteria by hot aqueous-phenol extraction［J］. Journal of Visualized Experiments,2012,63:3916.
15 DevbRoy C,Roberts E,Davis M,et al. Multiplex polymerase chain reaction assay for detection of nonserotypable Shiga toxin-producing Escherichia coli strains of serogroup O147［J］. Foodborne Pathogens and Disease,2010,7(11):1407~1414.
16 Simin R, Noor A, Bahman T,et al. Extraction,purification and characterization of lipopolysaccharide from Escherichia coli and Salmonella typhic［J］. Avicenna J Med Biotechnol,2011,3(1):3~9.

[1]	钟粤韵, 杨舒展, 陈非玥, 陆智儿, 李冰心, 李婉雁, 田允波, 黄运茂, 许丹宁, 曹楠. LPS通过ROS/p38/MAPK信号通路对鹅胚肝细胞凋亡的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2224-2232.
[2]	邵永斌, 郑一闯, 张竞怡, 魏琳颖, 田勇, 孙国结, 刘雨然, 罗燕, 谷新利. 益母草碱对LPS诱导小鼠子宫内膜炎的抗炎作用研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2149-2155.
[3]	付京城, 何俊辉, 仝江, 吴魏, 郭爽, 杨彦宾, 韩莹倩, 王月影, 李和平. HO-1在巨噬细胞中的抗炎和抗氧化作用[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 807-816.
[4]	高嘉豪, 乔彦杰, 连科迅, 王蒙蒙, 谷新利, 邵永斌. 甘草酸对脂多糖应激黄羽肉仔鸡免疫性能的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(9): 3419-3427.
[5]	唐琳, 张军芳, 王英, 孙斌, 王恩泽, SHIN Jongsuh, 郭盼盼, 金鑫, 严昌国, 李香子, 李强. 犬脂肪来源间充质干细胞对重症急性胰腺炎体外内质网应激模型的抗凋亡作用[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1840-1851.
[6]	张玉珠, 于超, 郑慧华, 唐欣悦, 黄荣磊, 谢光洪. 原儿茶酸对LPS诱导的小鼠子宫内膜炎的作用机制研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(4): 1585-1591.
[7]	马思佳, 刘媛, 汪序忠, 李亭亭, 段星, 杨松柏, 宋丹, 李向臣. 褪黑素对脂多糖刺激的滩羊骨骼肌卫星细胞炎性因子表达的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(9): 3378-3386.
[8]	王倩, 汪曼丽, 宁楠, 王帅杰, 谭子涵, 王蕾, 赵迪, 张倩, 侯永清. N-乙酰半胱氨酸对脂多糖刺激仔猪免疫反应和小肠能量状态的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(11): 3996-4003.
[9]	邬琴, 张星星, 顾晓晓, 陶乔孝慈, 黄新, 韩猛立, 吴桐忠, 周霞, 钟发刚. 牛源多杀性巴氏杆菌血清分型及毒力相关基因的检测研究[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(6): 1910-1920.
[10]	谭娅, 甘麦邻, 范源, 王婧, 张雄, 黄波, 朱砺, 尚以顺, 史开志. 金荞麦对脂多糖诱导小鼠小肠炎症的保护作用[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(2): 597-604.
[11]	陈慕天, 任妍, 张蕾, 李静, 谢思婕, 张艳, 张明, 梅秀丽. CsA对LPS诱导的子宫内膜基质细胞中IL-1β和IL-6表达的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(10): 3351-3360.
[12]	冯妍, 倪和民, 郭勇, 盛熙晖, 齐晓龙, 邢凯, 王相国. 脂多糖对体外培养奶牛子宫内膜上皮细胞子宫容受性因子表达的影响[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(8): 2288-2295.
[13]	韩蓉, 王春, 陶佳丽, 任路路, 郭音, 姜俊兵. 鼠源重组UBC13蛋白对脂多糖诱导的小鼠急性炎症的影响[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(4): 1158-1165.
[14]	宋转, 赵广宇, 董毅, 纪昌正, 李思源, 王蕾, 易丹, 侯永清. 复合植物精油对脂多糖刺激断奶仔猪肠道形态结构和抗氧化能力的影响[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(3): 684-689.
[15]	赵文华, 庄锋, 熊春红, 刘宇, 付书林, 邱银生. 黄芩苷对脂多糖诱导后仔猪的血管紧密连接蛋白表达量和MLCK-MLC的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2019, 46(11): 3190-3197.