牛、羊、猪、犬布鲁氏菌病多重PCR方法的建立

中国畜牧兽医

牛、羊、猪、犬布鲁氏菌病多重PCR方法的建立

陈思¹，王秀然^{1，钱晶¹，王晓旭¹，郎需龙^1，2，王兴龙^{1^，2}}

（1.军事医学科学院军事兽医研究所，吉林长春 130122；2.吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室，吉林长春 130122）

收稿日期:2013-09-05 出版日期:2014-02-20 发布日期:2014-03-27
通讯作者: 王兴龙（1959—），男，内蒙古人，博士生导师，研究员，研究方向：兽医微生物学及免疫学。E-mail：wangxl-2006＠163.com
作者简介:陈思（1988—），女，辽宁人，硕士生，研究方向：兽医微生物学与免疫学。
基金资助:
国家公益性行业(农业)科研专项（201303042)。

Development of a Multiplex PCR for Detection of Brucella abortus， Brucella melitensis，Brucella suis and Brucella canis

CHEN Si¹，WANG Xiu-ran¹，QIAN Jing¹，WANG Xiao-xu¹，LANG Xu-long¹^，2，WANG Xing-long¹^，2

（1.Institute of Military Veterinary，Academy of Military Medical Sciences，Changchun 130122，China； 2.Key Laboratory of Jilin Province for Zoonosis Prevention and Control，Changchun 130122，China）

Received:2013-09-05 Online:2014-02-20 Published:2014-03-27

摘要/Abstract

摘要： 试验旨在建立一种快速检测牛、羊、猪、犬布鲁氏菌病的多重PCR方法。根据布鲁氏菌IS711拷贝数的差异和基因序列上的缺失序列设计4对引物，优化多重PCR反应体系和反应条件，分析了PCR的特异性、灵敏度、稳定性。建立的多重PCR方法对牛、羊、猪、犬布鲁氏菌均能扩增出预期片段，扩增片段大小分别为494、732、591、272 bp。牛、羊、猪、犬布鲁氏菌的灵敏度分别为1.1×10²、5.1×10²、3.5×10²、2.5×10² CFU/mL。初步应用该方法检测人工模拟的牛奶样品，灵敏度能达到1.0×10³ CFU/mL。本试验建立的多重PCR检测方法简单、快速、灵敏度高，具有很好的应用前景，对牛、羊、猪、犬布鲁氏菌病的鉴定具有重要意义。

关键词: 布鲁氏菌; 多重PCR; 检测

Abstract: The purpose of the experiment was to establish a rapid multiplex PCR detection method which could distinguish B.abortus，B.melitensis，B.suis and B.canis. According to the differences of IS711 and complete genome sequences，four pairs of primers were designed. Multiplex PCR reaction system and conditions were optimized，the specificity，sensitivity and stability of the multiplex PCR were analyzed.Through the establishment of the multiplex PCR，B.abortus，B. melitensis，B. suis and B.canis could amplify the expected fragment，the sizes of the expected fragment were 494，732，591 and 272 bp，respectively. The PCR sensitivity of B.abortus，B.melitensis，B.suis and B.canis were 1.1×10²，5.1×10²，3.5×10² and 2.5×10² CFU/mL，respectively. Detected artificially infectious samples of milk by PCR，PCR sensitivity could reach 1.0×10³ CFU/mL.The developed multiplex PCR method was simple，fast，high sensitivity，and had good prospects and important significance for the identification of B.abortus，B.melitensis，B.suis and B.canis.

Key words: Brucella; multiplex PCR; detection

陈思，王秀然，钱晶，王晓旭，郎需龙，王兴龙. 牛、羊、猪、犬布鲁氏菌病多重PCR方法的建立[J]. 中国畜牧兽医.

CHEN Si，WANG Xiu-ran，QIAN Jing，WANG Xiao-xu，LANG Xu-long，WANG Xing-long. Development of a Multiplex PCR for Detection of Brucella abortus， Brucella melitensis，Brucella suis and Brucella canis[J]. .

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