鸡传染性贫血病病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

›› 2014, Vol. 41 ›› Issue (12): 45-49.

鸡传染性贫血病病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

郭翠丽^1,2, 张春红², 郭鹏举², 张建峰², 沈海燕², 潘家强¹

1. 华南农业大学, 广东广州 510640;
2. 广东省农业科学院动物卫生研究所, 广东广州 510640

收稿日期:2014-03-07 出版日期:2014-12-20 发布日期:2014-12-25
通讯作者: 潘家强 E-mail:panjq@scau.edu.cn
作者简介:郭翠丽(1987－),女,河南人,硕士,研究方向:鸡传染性贫血病.
基金资助:
广东省农业科学院院长基金项目(201114);广东省科技计划项目(2011B050700007、2012B050500013);广州市科技计划项目(2013J4500031).

Development of TaqMan Fluorescence Quantitative PCR Assay for Detection of Chicken Infectious Anemia Virus

GUO Cui-li^1,2, ZHANG Chun-hong², GUO Peng-ju², ZHANG Jian-feng², SHEN Hai-yan², PAN Jia-qiang¹

1. South China Agricultural University, Guangzhou 510640, China;
2. Institute of Animal Health, Guangdong Academy of Agricultural Sciences, Guangzhou 510640, China

Received:2014-03-07 Online:2014-12-20 Published:2014-12-25

摘要/Abstract

摘要： 根据鸡传染性贫血病病毒(chicken infectious anemia virus,CAV)基因组保守区域设计1对特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立了一种快速检测CAV的TaqMan实时荧光定量PCR方法,同时验证其特异性、灵敏性和重复性.本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度可达1.8×10¹拷贝/μL,远高于常规PCR方法;并与禽类其他病毒性疾病无交叉反应,具有高特异性.用分离的病毒人工感染1日龄SPF雏鸡,14日龄剖检,对感染鸡体内各器官的病毒分布及载量进行检测,结果表明,在脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸腺、法氏囊和血清中均可检测到病毒,肝脏、胸腺病毒载量明显高于其他组织.本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可同时检测大量临床样品,适用于CAV的诊断与流行病学分析.

关键词: 鸡传染性贫血病病毒(CAV); TaqMan实时荧光定量PCR; 探针

Abstract: A fluorescence quantitative PCR assay was developed using primers and probes designed according to a high conservative sequence of chicken infectious anemia virus (CAV). Detection of viral DNA copy number was determined by extrapolation from a CAV plasmid-based standard curve. The results showed that the estimated average viral copy number could detect 1.8×10¹ copies/μL of plasmid DNA with high reproducibility (CAV of the intra or inter) assay was below 2%. Furthermore, 1 day-old SPF chicken were inoculated with CAV and the virus loads were detected in multiple organs. The results showed that the virus could be detected in the brain, heart, liver, spleen, lung, kidney, thymus, bursa and serum and the virus loads in these organs showed no significant difference. No cross-reaction was detected with other avian virus.

Key words: chicken infectious anemia virus; TaqMan Real-time PCR; probe

中图分类号:

S852.65⁺9.2

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