狂犬病病毒糖蛋白原核表达及纯化

›› 2013, Vol. 40 ›› Issue (10): 61-64.

狂犬病病毒糖蛋白原核表达及纯化

傅宏庆¹, 姚志兰¹, 陆江¹, 刘俊栋¹, 贾红²

1. 江苏农牧科技职业学院, 江苏泰州 225300;
2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京 100193

修回日期:2013-08-16 出版日期:2013-10-20 发布日期:2013-12-19
通讯作者: 贾红 E-mail:jiahong80@126.com
作者简介:傅宏庆(1979-),男,江苏人,硕士,研究方向:兽医临床。
基金资助:
公益性行业(农业)科研专项经费(201303042)。

Prokaryotic Expression and Purification of Glycoprotein Gene of Rabies Virus

FU Hong-qing¹, YAO Zhi-lan¹, LU Jiang¹, LIU Jun-dong¹, JIA Hong²

1. Jiangsu Agri-animal Husbandry Vocational College, Taizhou 225300, China;
2. Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China

Revised:2013-08-16 Online:2013-10-20 Published:2013-12-19

摘要/Abstract

摘要： 试验旨在提高狂犬病病毒(rabies virus,RV)糖蛋白(G)在大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中的表达量。通过优化蛋白质诱导表达的温度、时间、诱导剂浓度等条件,以提高该蛋白质的表达量。SDS-PAGE电泳分析结果显示,重组质粒在1 mmol/mL IPTG、30 ℃诱导6 h条件下蛋白表达量最高,经GST-resin亲和层析柱法纯化获得的纯化蛋白约为36 ku,与预期大小相符。Western blotting结果显示,表达蛋白具有很好的免疫原性和特异性。结果表明,RV G融合蛋白的优化表达和纯化为RV亚单位疫苗及中和抗体的研制奠定了基础。

关键词: 狂犬病病毒; 糖蛋白; 融合蛋白; 纯化

Abstract: In order to improve the expression level of glycoprotein gene of rabies virus (RV) in Escherichia coli BL21(DE3), the optimal conditions for expression of RV G fusion protein (GST-RVG) were analyzed by SDS-PAGE, including different temperatures, different inducing times and concentrations of IPTG. The protein was purified by GST-resin affinity column. The results showed that the expression level of fusion protein expressed in Escherichia coli BL21(DE3) at 30 ℃ for 6 h, and induced with 1 mmol/mL IPTG was highest.The fusion protein was about 36 ku,which was consistent with the expected. The result of Western blotting showed that the fusion protein had good immunogenicities and specificities. Optimizing the expression and purification of RV G fusion protein was benefit for developing sub-unit vaccine and neutralizing antibody of RV.

Key words: rabies virus; glycoprotein; fusion protein; purification

中图分类号:

Q786

傅宏庆, 姚志兰, 陆江, 刘俊栋, 贾红. 狂犬病病毒糖蛋白原核表达及纯化[J]. , 2013, 40(10): 61-64.

FU Hong-qing, YAO Zhi-lan, LU Jiang, LIU Jun-dong, JIA Hong. Prokaryotic Expression and Purification of Glycoprotein Gene of Rabies Virus[J]. , 2013, 40(10): 61-64.

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