产肠毒素大肠杆菌双重PCR检测方法的建立

›› 2013, Vol. ›› Issue (7): 65-68.

产肠毒素大肠杆菌双重PCR检测方法的建立

曲泽慧^1,2, 陈佩佩², 张爱芹³, 郭东春¹, 林欢¹, 姜骞¹, 刘家森¹, 师东方², 曲连东^1,2

1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所, 黑龙江哈尔滨 150001;
2. 东北农业大学, 黑龙江哈尔滨 150030;
3. 黑龙江八一农垦大学动物科技学院, 黑龙江大庆 163319

收稿日期:2013-01-07 出版日期:2013-07-20 发布日期:2013-07-24
通讯作者: 师东方,曲连东 E-mail:dfshi@yahoo.com.cn;qld@hvri.ac.cn
作者简介:曲泽慧(1990-),男,黑龙江人,硕士生,研究方向:预防兽医学。
基金资助:
科技部国际合作项目(2010DFB33620);东北农业大学科创基金;国家科技支撑计划课题(2012BAD12B03、2012BAD12B05、2013BAK11B01)。

Double PCR for Detection of Virulence Genes K88 and K99 of Enterotoxigenic Escherichia coli Strains

QU Ze-hui^1,2, CHEN Pei-pei², ZHANG Ai-qin³, GUO Dong-chun¹, LIN Huan¹, JIANG Qian¹, LIU Jia-sen¹, SHI Dong-fang², QU Lian-dong^1,2

1. Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150001, China;
2. Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China;
3. Heilongjiang Bayi Agricultural University, Daqing 163319, China

Received:2013-01-07 Online:2013-07-20 Published:2013-07-24

摘要/Abstract

摘要： 为了快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88和K99)基因,本研究设计合成了针对K88、K99的2对特异性引物,对扩增条件进行优化,建立了检测K88和K99的双重PCR方法。该方法对K88、K99基因的扩增产物大小分别为237和314 bp;最终确定dNTP终浓度0.4 mmol/L,K88、K99的引物终浓度均为25 μmol/L,退火温度为52℃。试验结果表明,该方法具有良好的灵敏性和特异性。用所建立的双重PCR方法对实验室分离的23株大肠杆菌进行检测,结果显示,K88单重PCR阳性2株,K99单重PCR阳性3株,K88和K99双重PCR阳性5株。本研究建立的双重PCR检测方法为致幼畜腹泻产肠毒素大肠杆菌的快速准确检测提供了方法。

关键词: 产肠毒素大肠杆菌; 双重PCR; K88菌毛; K99菌毛

Abstract: To detect and identify two fimbriae genes (K88 and K99) of enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC), a double PCR method was developed based on 2 pairs of primers for K88 and K99 genes amplification. 2 different virulence genes of the reference E.coli strain which passed was detected and the double PCR was proved to be specificity and sensitivity. The PCR amplification conditions ultimately were determined that dNTP concentration were 0.4 mmol/L, K88 and K99 primers concentration were both 25 μmol/L and the annealing temperature was 52℃. Furthermore, a total of 23 samples of E.coli were tested by the double PCR assay and the results showed 2 samples were K88, 3 samples were K99, and 5 samples were K88 and K99 positive. The double PCR assay provided a method to detect ETEC which caused diarrhea in piglets.

Key words: enterotoxigenic Escherichia coli; double PCR; K88 fimbriae; K99 fimbriae

中图分类号:

曲泽慧, 陈佩佩, 张爱芹, 郭东春, 林欢, 姜骞, 刘家森, 师东方, 曲连东. 产肠毒素大肠杆菌双重PCR检测方法的建立[J]. , 2013, (7): 65-68.

QU Ze-hui, CHEN Pei-pei, ZHANG Ai-qin, GUO Dong-chun, LIN Huan, JIANG Qian, LIU Jia-sen, SHI Dong-fang, QU Lian-dong. Double PCR for Detection of Virulence Genes K88 and K99 of Enterotoxigenic Escherichia coli Strains[J]. , 2013, (7): 65-68.

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