Q热贝氏柯克斯体环介导等温扩增实时浊度检测法的建立

›› 2013, Vol. ›› Issue (5): 19-22.

Q热贝氏柯克斯体环介导等温扩增实时浊度检测法的建立

贾广乐, 徐丽丽, 廖娟红

中国检验检疫科学研究院, 北京 100121

修回日期:2013-03-13 出版日期:2013-05-20 发布日期:2013-05-27
作者简介:贾广乐(1973-),男,山西人,博士生,副研究员,研究方向:动物检疫。
基金资助:
动物Q热检疫技术及标准研究(201110247)。

The Establishment of the Real-time Turbidity Assay of Loop-mediated Isothermal Amplification Detection Method for Q Fever

JIA Guang-le, XU Li-li, LIAO Juan-hong

The Chinese Academy of Inspection and Quarantine, Beijing 100121, China

Revised:2013-03-13 Online:2013-05-20 Published:2013-05-27

摘要/Abstract

摘要： 根据Q热贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)插入序列IS1111序列设计1套特异性引物,建立快速检测Q热的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)实时浊度检测方法。以梯度稀释含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,在恒温反应条件下,对靶基因的特定区域进行扩增,建立LAMP检测方法。结果显示,该方法能够检测出10个拷贝数的阳性质粒,而对结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、衣原体(C.psittaci)、布鲁氏杆菌(Brucella.spp)及部分牛血液的核酸样本的特异性检测结果均为阴性,无交叉反应。本研究建立的LAMP实时浊度检测方法灵敏度高、特异性好,在Q热的检测与鉴定中具有良好的应用前景。

关键词: Q热; 贝氏柯克斯体; 环介导等温扩增; 实时浊度检测法

Abstract: One pair of specific primers was designed based on inserting sequence IS1111 of Q fever Coxiella burnetii, Real-time turbidity assay of loop-mediated isothermal amplification (LAMP) was developed for indentification Q fever. The recombinant plasmid containing the target sequence was constructed to detect the sensitivity of LAMP with the isothermal temperature. The method could detect 10 of the plasmid copy number. The established Real-time turbidity assay of LAMP method showed no cross reaction with M.tuberculosis, C.psittaci, Brucella.spp and DNA of bovine bloods were negative. Real-time turbidity assay of LAMP was developed in this study and had high sensitivity and specificity,it had a good application prospects in the detection and identification of the Q fever.

Key words: Q feve; Coxiella burnetii; loop-mediated isothermal amplification (LAMP); Real-time turbidity assay

中图分类号:

S852.62

贾广乐, 徐丽丽, 廖娟红. Q热贝氏柯克斯体环介导等温扩增实时浊度检测法的建立[J]. , 2013, (5): 19-22.

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