Vero E6细胞中B23.1基因的扩增及其原核表达

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (3): 33-36.

Vero E6细胞中B23.1基因的扩增及其原核表达

吕茂杰^1,2, 陈建飞¹, 时洪艳¹, 冯力¹

1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所, 兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室, 黑龙江哈尔滨 150001;2. 瑞普瑞普(保定)生物药业有限公司,河北保定 071000

收稿日期:2011-08-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2012-03-20 发布日期:2012-03-20
通讯作者: 冯力

Amplification and Prokaryotic Expression of B23.1 Protein Gene in Vero E6 Cell

LV Mao-jie^1,2, CHEN Jian-fei¹, SHI Hong-yan¹, FENG Li¹

1. Division of Porcine Infectious Diseases, National Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150001, China;2. Ringpu (Daoding) Biological Pharmaceutical Co.Ltd., Baoding 071000, China

Received:2011-08-01 Revised:1900-01-01 Online:2012-03-20 Published:2012-03-20

摘要/Abstract

摘要： 应用RT-PCR技术,利用含有酶切位点的上、下游引物扩增得到Vero E6细胞中编码B23.1蛋白的基因片段,并进行序列测定及分析,结果表明,B23.1基因含有一个长901 bp的开放阅读框(ORF),未发现碱基的插入和缺失。将其进行BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切,而后定向克隆到经相同双酶切的pGEX-6p-1载体中,构建的重组质粒命名为pGEX-6p-B23.1;将该质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达;SDS-PAGE结果表明,表达出与预期大小相符的约68 ku的重组蛋白,重组蛋白主要以包涵体形式存在;Western blotting分析结果表明,表达的重组蛋白与B23蛋白单克隆抗体有很好的反应活性。

关键词: Vero E6细胞; B23.1基因; 重组蛋白; 反应活性

Abstract: A fragment containing B23.1 protein gene of Vero E6 cell was amplified by reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) using the upper/lower primers each including the recognition sequence for BamH Ⅰ and Xho Ⅰ respectively. The results showed that the ORF of B23.1 gene was composed of 901 bp, deletion and insertion were not found. By digestion with restriction enzymes BamH Ⅰ and Xho Ⅰ, the B23.1 gene were cloned into pGEX-6p-1 vector to construct recombinant plasmid named pGEX-6p-B23.1. The recombinant plasmid was transformed into E.coil BL21(DE3) and induced with IPTG. The results of SDS-PAGE assay showed that the protein was largely expressed,the GST-tagged protein was purified. Western blotting analysis showed that the target protein had a good reactivity with B23 monoclonal antibody (mouse).

Key words: Vero E6 cell; B23.1 gene; recombinant protein; reactivity

中图分类号:

Q786

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