猪流感病毒H1、H3、N1、N2亚型分型 RT-PCR方法的建立

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (3): 187-191.

猪流感病毒H1、H3、N1、N2亚型分型 RT-PCR方法的建立

齐海涛, 孔维立, 张桂红

华南农业大学兽医学院,广东广州 510642

收稿日期:2011-08-03 修回日期:1900-01-01 出版日期:2012-03-20 发布日期:2012-03-20
通讯作者: 张桂红

Development of RT-PCR Assay for Rapid Detection and Subtyping of Swine Influenza H1,H3,N1,N2 Viruses

QI Hai-tao, KONG Wei-li, ZHANG Gui-hong

College of Veterinary Medicine,South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China

Received:2011-08-03 Revised:1900-01-01 Online:2012-03-20 Published:2012-03-20

摘要/Abstract

摘要： 根据GenBank中H1N1和H3N2亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(neuraminidase,NA)和M基因保守序列,分别设计合成了5对特异性引物,利用RT-PCR技术对SIV的型和亚型进行鉴定。结果表明,该方法的型RT-PCR可以检测出10⁴EID₅₀病毒量所提取的RNA;H1、H3、N1和N2的亚型RT-PCR均可以检测出10⁴EID₅₀病毒量所提取的RNA。除每对特异性引物所对应的亚型外,对其他亚型及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)的检测均为阴性,应用该方法对临床样品进行检测,其结果与病毒分离结果符合率为100%。结果表明,该方法特异性好、敏感性高,有望成为SIV的一种特异、敏感、快速的分型检测方法,为猪流感分子流行病学的调查奠定了良好的基础。

关键词: 猪流感病毒; H1亚型; H3亚型; N1亚型; N2亚型; RT-PCR方法

Abstract: According to the genomic sequence of H1N1,H3N2 subtype swine influenza virus (SIV) published in GenBank, the specific primers were designed according to the conserved region of H1,H3 HA,N1,N2 NA and M genes of swine influenza virus (SIV) H1N1,H3N2 subtype. RT-PCR assay was developed for detection of swine influenza H1,H3,N1,N2 subtype. The results showed that the RT-PCR was capable of detecting 10⁴ EID₅₀ of M and 10⁴ EID₅₀ of HA or NA. The results were negative for the detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus,CSFV and other subtypes except the corresponding subtype. The coincidence rates between RT-PCR and virus isolation were 100%. This assay provides a rapid,sensitive,and cost-effective laboratory diagnosis for detecting and subtyping of SIV in pigs.

Key words: swine influenza virus; H1 subtype; H3 subtype; N1 subtype; N2 subtype; RT-PCR

中图分类号:

S852.659.5

齐海涛;孔维立;张桂红. 猪流感病毒H1、H3、N1、N2亚型分型 RT-PCR方法的建立[J]. , 2012, 39(3): 187-191.

QI Hai-tao;KONG Wei-li;ZHANG Gui-hong. Development of RT-PCR Assay for Rapid Detection and Subtyping of Swine Influenza H1,H3,N1,N2 Viruses[J]. , 2012, 39(3): 187-191.

[1]	廖思雨, 郑新, 戴琪, 许诗怡, 张天旭, 张秀桥, 桂春. 空心莲子草乙酸乙酯部位体内外抗H9N2亚型禽流感病毒活性的研究[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(2): 759-769.
[2]	谢守玉, 王睿敏, 崔鹏飞, 施开创, 韦显凯, 冯淑萍, 龙凤, 屈素洁, 陆文俊, 黄金山, 黄凤梅, 温新瑞, 尹彦文, 邓国华. 2株海鸭源H3亚型禽流感病毒全基因组分子特征分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1319-1328.
[3]	黄书, 曾智勇, 梁海英, 汤德元, 王彬, 边孟婷, 柳佳佳, 张婧旭, 万娟, 潘向英, 田红利. 1株H1N1亚型猪流感病毒的进化分析及分子特征研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(12): 5084-5093.
[4]	侯晓红, 王蒙, 武博, 龙宪荣, 赵孝民, 高静, 戴培强, 柴同杰. H9N2亚型禽流感病毒SD18株的传染性及不同途径感染效果比较[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(4): 1449-1460.
[5]	杨景, 张新宇, 梁志鹏, 程晴, 王聪颖, 池仕红, 袁生, 郭锦玥, 黄淑坚, 温峰. H9N2亚型禽流感病毒NP蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(10): 3963-3971.
[6]	江宁, 尹航, 张岩威, 李紫馨, 池晓娟, 王松. H9N2亚型禽流感病毒与其他病原混合感染的研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(9): 3447-3455.
[7]	程邓芳, 梅晨, 刘娟, 王宏俊, 先宏. 中药复方对H9N2亚型禽流感病毒在MDCK细胞增殖的作用[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(2): 650-657.
[8]	李青梅, 郭军庆, 孟泽锟, 李艳华, 刘肖, 石建州, 李鸽, 柴书军, 罗俊, 邓瑞广, 张改平. H9N2亚型禽流感病毒中和单克隆抗体的制备与应用[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3761-3769.
[9]	程艺, 田辉, 张亚, 薛景景, 盛东北, 刘武杰, 王婉冰, 张盼涛, 田克恭. H9亚型禽流感病毒HF株的分离鉴定和免疫原性评价[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(9): 2945-2952.
[10]	黄良宗, 颜广智, 邓汝森, 陈盛楠, 张海龙, 顾万军. 猪流感病毒广东株分离鉴定及遗传进化分析[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(8): 2625-2633.
[11]	黄良宗, 张海龙, 颜广智, 谢博, 陈盛楠, 邓汝森, 顾万军. microRNA-124-3p调控H1N1亚型猪流感病毒致小鼠肺损伤的研究[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(10): 3049-3057.
[12]	石建州, 李青梅, 王彦红, 刘肖, 李鸽, 郭军庆, 邓瑞广, 张改平. H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体IPMA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2019, 46(9): 2691-2698.
[13]	彭成成, 吴熠潇, 刘旭平, 谭文松. H9N2亚型禽流感病毒纯化及病毒HA蛋白定量方法研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(7): 2069-2078.
[14]	李珮瑶, 梁亭, 罗强, 王少华, 李军, 徐明举, 张瑞华, 徐彤. H9N2亚型猪源性流感病毒在小鼠肺微血管内皮细胞内最佳增殖条件的研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2018, 45(6): 1708-1714.
[15]	程邓芳, 王红均, 黄庆洲, 张莉, 刘娟, 先宏. 海藻硫酸多糖和中药复方对鸡胚接种H9N2亚型禽流感病毒的作用[J]. 《中国畜牧兽医》, 2018, 45(12): 3594-3600.