猪流感病毒H1、H3、N1、N2亚型分型 RT-PCR方法的建立

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (3): 187-191.

猪流感病毒H1、H3、N1、N2亚型分型 RT-PCR方法的建立

齐海涛, 孔维立, 张桂红

华南农业大学兽医学院,广东广州 510642

收稿日期:2011-08-03 修回日期:1900-01-01 出版日期:2012-03-20 发布日期:2012-03-20
通讯作者: 张桂红

Development of RT-PCR Assay for Rapid Detection and Subtyping of Swine Influenza H1,H3,N1,N2 Viruses

QI Hai-tao, KONG Wei-li, ZHANG Gui-hong

College of Veterinary Medicine,South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China

Received:2011-08-03 Revised:1900-01-01 Online:2012-03-20 Published:2012-03-20

摘要/Abstract

摘要： 根据GenBank中H1N1和H3N2亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(neuraminidase,NA)和M基因保守序列,分别设计合成了5对特异性引物,利用RT-PCR技术对SIV的型和亚型进行鉴定。结果表明,该方法的型RT-PCR可以检测出10⁴EID₅₀病毒量所提取的RNA;H1、H3、N1和N2的亚型RT-PCR均可以检测出10⁴EID₅₀病毒量所提取的RNA。除每对特异性引物所对应的亚型外,对其他亚型及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)的检测均为阴性,应用该方法对临床样品进行检测,其结果与病毒分离结果符合率为100%。结果表明,该方法特异性好、敏感性高,有望成为SIV的一种特异、敏感、快速的分型检测方法,为猪流感分子流行病学的调查奠定了良好的基础。

关键词: 猪流感病毒; H1亚型; H3亚型; N1亚型; N2亚型; RT-PCR方法

Abstract: According to the genomic sequence of H1N1,H3N2 subtype swine influenza virus (SIV) published in GenBank, the specific primers were designed according to the conserved region of H1,H3 HA,N1,N2 NA and M genes of swine influenza virus (SIV) H1N1,H3N2 subtype. RT-PCR assay was developed for detection of swine influenza H1,H3,N1,N2 subtype. The results showed that the RT-PCR was capable of detecting 10⁴ EID₅₀ of M and 10⁴ EID₅₀ of HA or NA. The results were negative for the detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus,CSFV and other subtypes except the corresponding subtype. The coincidence rates between RT-PCR and virus isolation were 100%. This assay provides a rapid,sensitive,and cost-effective laboratory diagnosis for detecting and subtyping of SIV in pigs.

Key words: swine influenza virus; H1 subtype; H3 subtype; N1 subtype; N2 subtype; RT-PCR

中图分类号:

S852.659.5

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