中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2cDNA的克隆与原核表达

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (2): 20-24.

中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2cDNA的克隆与原核表达

焦寒伟¹, 王洪梅², 刘晓², 杜丽¹, 雷明¹, 张冬琳¹, 郝永昌¹, 成鹰¹, 何洪彬², 王凤阳¹

1. 海南大学农学院,海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室(筹),海口市动物基因工程重点实验室,海南海口 570228;2. 山东省农业科学院奶牛中心,山东济南 250183

收稿日期:2011-07-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2012-02-20 发布日期:2012-02-20
通讯作者: 王凤阳

Cloning and Prokaryotic Expession of MD-2 from Chinese Holstein Dairy Cow

JIAO Han-wei¹, WANG Hong-mei², LIU Xiao², DU Li¹, LEI Ming¹, ZHANG Dong-lin¹, HAO Yong-chang¹, CHENG Ying¹, HE Hong-bin², WANG Feng-yang¹

1. Hainan Key Laboratory of Tropical Animal Reproduction & Breeding and Epidemic Disease Research (Construction Period),Animal Genetic Engineering Key Laboratory of Haikou,College of Agriculture,Hainan University,Haikou 570228,China;2. Dairy Cattle Research Centre,Shandong Acdemy of Agriculture Science,Jinan 250183,China

Received:2011-07-01 Revised:1900-01-01 Online:2012-02-20 Published:2012-02-20

摘要/Abstract

摘要： 本试验旨在克隆并表达中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2(myeloid differentiation protein -2,MD-2)基因,并用Western blotting进行鉴定。采用RT-PCR技术从中国荷斯坦奶牛外周血白细胞中扩增MD-2 cDNA,并将扩增产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经测序鉴定后,构建pET28a-MD-2重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果表明,目的基因含有1个483 bp的开放阅读框,编码161个氨基酸;与黄牛、黑猩猩和小鼠MD-2的cDNA序列同源性分别为99.38%、77.02%、68.12%,氨基酸同源性分别为98.75%、65.00%和58.13%。融合蛋白以包涵体的形式存在,分子质量约为25 ku。说明本研究成功克隆并表达了中国荷斯坦奶牛MD-2 cDNA,为其进一步的功能研究提供了理论依据。

关键词: 中国荷斯坦奶牛; 髓样分化蛋白-2; 克隆; 原核表达

Abstract: In order to clone,express and identify myeloid differentiation-2 of Holstein dairy cow,total RNA was isolated from Chinese Holstein dairy cow,RT-PCR was used to amplify MD-2 cDNA. The PCR products were and cloned into pMD20-T vector and the recombinant plasmid was confirmed by PCR,endonuclease digestion. MD-2 was cloned into pET28a vector to construct the pET28a-MD-2,protein expression was induced by IPTG and analyzed by SDS-PAGE and Western blotting. The results showed that the MD-2 gene contain a 483 bp ORF encoding 161 amino acids; His-MD-2 fusion protein was expressed in E.coli BL21(DE3) with molecular weight of 25 ku after induced by IPTG.

Key words: Chinese Holstein dairy cow; MD-2; cloning; prokaryotic expression

中图分类号:

Q785

焦寒伟;王洪梅;刘晓;杜丽;雷明;张冬琳;郝永昌;成鹰;何洪彬;王凤阳. 中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2cDNA的克隆与原核表达[J]. , 2012, 39(2): 20-24.

JIAO Han-wei;WANG Hong-mei;LIU Xiao;DU Li;LEI Ming;ZHANG Dong-lin;HAO Yong-chang;CHENG Ying;HE Hong-bin;WANG Feng-yang. Cloning and Prokaryotic Expession of MD-2 from Chinese Holstein Dairy Cow[J]. , 2012, 39(2): 20-24.

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