山羊痘病毒p32基因的克隆、表达及单克隆抗体制备

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (9): 101-105.

山羊痘病毒p32基因的克隆、表达及单克隆抗体制备

王永志^1,3, 苏颖¹, 米丽娟², 付云红², 范志强³, 扈荣良³, 赵玉民¹

1. 吉林省农业科学院,吉林长春 130124;2. 吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春 130118;3. 中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春 130062

收稿日期:2011-01-21 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-09-20 发布日期:2011-09-20
通讯作者: 赵玉民

Clone,Expression and Monoclonal Antibody Preparation of p32 Gene of GPV

WANG Yong-zhi^1,3, SU Ying¹, MI Li-juan², FU Yun-hong², FAN Zhi-qiang³, HU Rong-liang³, ZHAO Yu-min¹

1. Jilin Academy of Agricultural Sciences, Changchun 130124, China;2. College of Animal Science and Technology, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China;3. Veterinary Institute, Academy of Military Medical Sciences of PLA, Changchun 130062, China

Received:2011-01-21 Revised:1900-01-01 Online:2011-09-20 Published:2011-09-20

摘要/Abstract

摘要： 本研究旨在表达山羊痘病毒p32蛋白、制备p32蛋白单克隆抗体。通过PCR克隆p32基因,连接到pMD18-T并测序;酶切、连接后将p32基因克隆到pET28a(+)中,将重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,在IPTG诱导下成功表达p32蛋白;利用亲和层析法纯化p32蛋白,用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠后制备p32蛋白单克隆抗体,获得22株识别重组蛋白的单抗,通过间接免疫荧光鉴定,其中3株能识别病毒的p32蛋白。山羊痘病毒p32蛋白的表达和单克隆抗体的制备为山羊痘病毒抗原、抗体检测提供了生物材料。

关键词: 山羊痘病毒; p32基因; 单克隆抗体

Abstract: For expressing and preparing monoclonal antibody of CPV p32 protein,p32 gene was cloned and inserted into plasmid pET28a(+),and expressed efficiently in E.coli Rosseta by IPTG induction. After purification by affinity chromatograph,p32 protein was immunized as antigen to BALB/c mouse. 22 monoclonal antibodies which recognize recombinant p32 protein were obtained,among them,3 could recognize CPV. These monoclonal antibodies provided biomaterials for sandwich ELISA testing CPV and competitive ELISA testing CPV antibodies.

Key words: CPV; p32 gene; monoclonal antibody

中图分类号:

王永志;苏颖;米丽娟;付云红;范志强;扈荣良;赵玉民. 山羊痘病毒p32基因的克隆、表达及单克隆抗体制备[J]. , 2011, 38(9): 101-105.

WANG Yong-zhi;SU Ying;MI Li-juan;FU Yun-hong;FAN Zhi-qiang;HU Rong-liang;ZHAO Yu-min. Clone,Expression and Monoclonal Antibody Preparation of p32 Gene of GPV[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2011, 38(9): 101-105.

[1]	王小格, 司煊瑛, 闫志伟, 王飞, 尤龙琪, 刘梗, 蔡茂, 梁珺珹, 梁玉秀, 杜永坤, 张改平. 非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(2): 781-791.
[2]	韩凤烨, 刘莹, 潘晨帆, 张乾义, 陈小云, 朱真, 印春生, 温永俊, 王凤雪, 杜吉革. 产气荚膜梭菌Alpha毒素突变体的表达及单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(1): 442-450.
[3]	程晶, 陈沛霖, 郭禹, 崔锦蔷, 江波, 周林宜, 刘文晓, 李焕荣, 李永清. 牛早幼粒细胞白血病蛋白的原核表达及单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(9): 4014-4024.
[4]	崔锦蔷, 程晶, 江波, 周林宜, 刘文晓, 李永清, 宋勤叶. 鸡γ-干扰素的原核表达及其单克隆抗体制备与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(7): 3008-3019.
[5]	付明智, 李新新, 刘雪威, 李焕荣. 猪源分泌性白细胞蛋白酶抑制因子的原核表达及单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(6): 2556-2565.
[6]	杨大为, 刘书怡, 蔺雅婷, 陈虎, 张洪亮, 李桂梅. 猪伪狂犬病病毒gB蛋白单克隆抗体的制备及竞争ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(12): 5439-5448.
[7]	曹梦瑶, 王晶, 周林宜, 程晶, 李永清, 许健, 江波, 胡格. 抗鸡早幼粒细胞白血病蛋白单克隆抗体的制备及其在荧光检测中的应用[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(10): 4500-4509.
[8]	马天天, 张亚楠, 冯亚文, 岳怀宁, 王亚文, 苏恺, 袁晨, 逯纪成, 孙泰然, 薛文阁, 宋勤叶. 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(7): 2832-2842.
[9]	侯浩宇, 郑南南, 吴宏举, 陈寅龙, 李潮, 张昂克, 姬鹏超, 万博, 杜永坤, 张改平. 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备和鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1241-1249.
[10]	陈桂娥, 容芳, 冯夏宁, 孙荣航, 马绍钊, 郝文茜, 叶子安, 刘郁夫, 李作生, 陈瑞爱. 非洲猪瘟病毒p72蛋白原核表达及单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(11): 4646-4654.
[11]	王乐铭, 王瑜瑞, 曾子轩, 饶国顺, 吴正姣, 靳纬坤, 王冬英. 抗大片形吸虫Cat L1单克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 677-686.
[12]	赵少若, 黄甜, 郝丽影, 吴洪超, 汪志艳, 崔宁宁, 王亚玲, 邓均华, 田克恭. 犬轮状病毒单克隆抗体制备及胶体金试纸条检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4429-4437.
[13]	莫红芳, 揭凯, 陈鑫, 文威, 刘文强, 陈焕春, 钱平, 李祥敏. 猪塞尼卡谷病毒单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 307-317.
[14]	胡换仪, 汪建中, 刘昌锦, 林敏, 刘小兰, 魏黄思梧, 邓舜洲. 绿色荧光蛋白的真核表达及其单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 328-337.
[15]	曾建宇, 董振远, 贾文凤, 张国中, 薛佳. 新城疫病毒M蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(9): 3423-3431.