海南黄牛Cdc42 cDNA的克隆、表达及鉴定

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (6): 68-71.

海南黄牛Cdc42 cDNA的克隆、表达及鉴定

张冬琳, 杜丽, 成鹰, 刘涛, 雷明, 满初日嘎, 王凤阳

海南大学农学院,海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室(筹), 海口市动物基因工程重点实验室,海南海口 570228

收稿日期:2010-11-22 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-06-20 发布日期:2011-06-20

Cloning,Expression and Identification of Cdc42 from Hainan Yellow Cattle

ZHANG Dong-lin, DU Li, CHENG Ying, LIU Tao, LEI Ming, MANCHU Ri-ga, WANG Feng-yang

College of Agriculture,Hainan University,Hainan Key Laboratory of Tropical Animal Reproduction & Breeding and Epidemic Disease Research (being Built),Animal Genetic Engineering Key Laboratory of Haikou,Haikou 570228, China

Received:2010-11-22 Revised:1900-01-01 Online:2011-06-20 Published:2011-06-20

摘要/Abstract

摘要： 试验以构建的海南黄牛外周血白细胞cDNA文库为材料,采用菌落PCR的方法筛选出海南黄牛细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42,Cdc42)全长cDNA,构建pET28a-Cdc42重组质粒,经IPTG诱导表达后,进行可溶性分析和蛋白纯化,并应用Western blotting对其进行鉴定。结果显示,海南黄牛Cdc42 cDNA的编码框由576个碱基组成,编码191个氨基酸,融合蛋白分子质量约为30 ku,该蛋白主要以包涵体形式存在;纯化后的蛋白经Western blotting检测,发现对应大小的特异性条带,表明本试验成功克隆Cdc42并表达。

关键词: 海南黄牛; Cdc42; 原核表达; 纯化

Abstract: Hainan Yellow cattle peripheral blood leukocyte cDNA library was used to screen Cdc42 cDNA and pET28a-Cdc42 recombinant plasmid was constructed. Protein expression was induced by IPTG, and analyzed by SDS-PAGE and Western blotting. The results showed that the Cdc42 was composed of 576 bp, encoding 191 amino acids; the protein about 30 ku as expected was expressed after induction with IPTG; after purification,the corresponding protein strip was detected by Western blotting. The data indicated that prokaryotic expression vector of Cdc42 was constructed and expressed successfully.

Key words: Hainan Yellow cattle; Cdc42; prokaryotic expression; identification

中图分类号:

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