PCR结合变性高效液相色谱法与荧光定量PCR法在检测禽白血病中的比较与应用

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (11): 157-162.

PCR结合变性高效液相色谱法与荧光定量PCR法在检测禽白血病中的比较与应用

孙涛¹, 张太翔², 徐彪¹, 梁成珠¹, 朱来华¹, 岳志芹¹

1. 山东出入境检验检疫局,山东青岛 266002;2. 潍坊出入境检验检疫局,山东潍坊 261041

收稿日期:2011-01-10 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-11-20 发布日期:2011-11-20
通讯作者: 徐彪

Compared the New Molecular Method for Rapid Detection of Avian Leukemia Virus by Using Denaturing High Performance Liquid Chromatography Combined with Nucleic Acid Amplification and Real-time PCR

SUN Tao¹, ZHANG Tai-xiang², XU Biao¹, LIANG Cheng-zhu¹, ZHU Lai-hua¹, YUE Zhi-qin¹

1. Shandong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Qingdao 266002,China;2. Weifang Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Weifang 261041,China

Received:2011-01-10 Revised:1900-01-01 Online:2011-11-20 Published:2011-11-20

摘要/Abstract

摘要： 本研究旨在比较PCR结合变性高效液相色谱技术(PCR-DHPLC)与荧光定量PCR(Real-time PCR)两种方法在检测禽白血病中的应用。根据禽白血病pol基因序列,设计1对引物和1条探针,利用引物进行禽白血病模板的RT-PCR扩增,产物经变性高效液相色谱上样处理;利用引物及探针进行荧光定量PCR扩增,结果与PCR-DHPLC进行比对。两种方法同时用正常鸡胚尿囊液、鸭瘟病毒、传染性支气管炎病毒、鹅细小病毒、H5N1亚型禽流感病毒、新城疫病毒、传染性法氏囊病毒、减蛋综合症病毒做特异性检测;以稀释成不同梯度的AV228毒株核酸做敏感性检测。试验结果表明PCR-DHPLC方法只对禽白血病病原有阳性扩增的吸收峰,Real-time PCR也只对禽白血病病原有阳性扩增,两法均对其他禽源病毒核酸无特异性扩增;PCR-DHPLC与Real-time PCR法相比,灵敏度虽低于Real-time PCR 1个数量级,但检测限仍可达到3 pg核酸模板。两种方法均能检测到感染鸡的泄殖腔拭子所采集的病毒量。采集120份蛋鸡棉拭子同时进行临床检测,两种方法检测ALV的符合率为100%(15/120)。研究表明两种方法均可用于诊断禽白血病病毒。

中图分类号:

S852.65

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