鸭Ⅰ型肝炎病毒VP1基因片段的克隆与表达载体的构建

›› 2010, Vol. 37 ›› Issue (7): 67-69.

鸭Ⅰ型肝炎病毒VP1基因片段的克隆与表达载体的构建

赵瑞宏，张丹俊，潘孝成，程宝艳，胡晓苗

（Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine,Anhui Academy of Agricultural Sciences,Hefei 230031,China）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-07-20 发布日期:2010-07-20

Cloning of VP1 Gene Fragments of Duck Hepatitis Virus TypeⅠand Construction of its Expression Plasmid

ZHAO Rui-hong，ZHANG Dan-jun，PAN Xiao-cheng，CHENG Bao-yan，HU Xiao-miao

（安徽省农业科学院畜牧兽医研究所，合肥 230031）

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-07-20 Published:2010-07-20

摘要/Abstract

摘要： 为研究鸭肝炎病毒VP1基因在大肠杆菌中的表达情况，根据鸭肝炎病毒核苷酸序列设计1对外引物和1对含有EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ酶切位点的内引物。以内外引物进行PCR扩增，将所得PCR产物回收，以相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET-32a后构建重组表达载体，并转入宿主菌BL21和Rosseta，经酶切、PCR和测序鉴定,证明VP1基因正确插入了表达载体。用不同浓度的IPTG诱导VP1基因的表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳，结果表明，VP1基因片段在大肠杆菌Rosseta和BL21中均难以表达。

关键词: 鸭肝炎病毒R85952株; VP1基因; 克隆; 表达

Abstract:

To study the expression of the duck hepatitis virus 1(DHV1) VP1 gene in E.coli ,one outer primer pair and one inter primer pair containing EcoR Ⅰ and Sal Ⅰ according to complete genome of DHV1 were designed. PCR products were re cycled by outer and inter primer pair .The PCR products and pET-32a vector were digested by EcoR Ⅰ and Sal Ⅰ to construct the recombinant plasmids.Then the recombinant plasmids were transfected into E.coli BL21 and Rosseta. After digestion, PCR and sequencing the target gene were insert expression vector correctly. With different concentrations of IPTG induced bacteria express VP1 gene, the bacterias were collected and examined by SDS-PAGE.The results showed that the VP1 gene fragments hard to express in E.coli Rosseta and BL21.

Key words: duck hepatitis virus R85952 strain; VP1 gene; cloning; expression

赵瑞宏;张丹俊;潘孝成;程宝艳;胡晓苗. 鸭Ⅰ型肝炎病毒VP1基因片段的克隆与表达载体的构建[J]. , 2010, 37(7): 67-69.

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