蜜蜂球囊菌全长cDNA文库的构建与分析

›› 2010, Vol. 37 ›› Issue (3): 112-114.

蜜蜂球囊菌全长cDNA文库的构建与分析

赵红霞^1，2，李江红¹，梁勤¹，罗岳雄²，张学锋^2

(1.福建农林大学蜂学学院，福州 350002； 2.广东省昆虫研究所，广州 510260）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-03-20 发布日期:2010-03-20
通讯作者: 梁勤

Construction and Analysis of a Full-length cDNA Library of Ascosphaera apis

ZHAO Hong-xia^1，2,LI Jiang-hong¹,LIANG Qin¹,LUO Yue-xiong²,ZHANG Xue-feng²

(1.College of Bee Science, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002,China;2.Guangdong Entomological Institute, Guangzhou 510260,China)

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-03-20 Published:2010-03-20
Contact: LIANG Qin

摘要/Abstract

摘要： 本试验利用TRIzol试剂盒提取蜜蜂球囊菌总RNA，通过Oligotex纯化试剂盒将mRNA反转录成cDNA,再以第一链cDNA为模板合成第二链cDNA，该cDNA产物经分级分离和体外包装，即获得蜜蜂球囊菌cDNA原始文库，其滴度测定为1.6×10⁶PFU/mL，扩增后的滴度是1.5×10⁹ PFU/mL；取适量扩增文库稀释并铺平板，蓝白斑筛选独立噬菌斑，用M13±通用引物进行PCR扩增后，文库的重组率达到90%，插入cDNA片段的长度在0.5～2 kb。该文库的构建，有利于筛选目的基因，便于深入研究蜜蜂白垩病的侵染机制，最终有效防制白垩病。

关键词: 蜜蜂球囊菌; 全长cDNA文库; 噬菌体

Abstract: In this study，the total RNA of Ascosphaera apis was extracted by using TRIzol reagent. The Oligo reverse transcriptase was used to synthesize and anchor the first strand Cdna.Following the production of the first reverse transciption,we synthesize the second Cdna. The production of cDNA was separated by classes and packed outside, then we could get the cDNA original library of Ascosphaera apis.The unamplified cDNA library contaied 1.6×10⁶ PFU/mL independent clones. The titer of the amplified library was 1.5×10⁹PFU/mL. Taking suitable amplified library to dilute and litter the flat, picking single plaques and then using common primer M13± to amplify，the recombination clones with an average insert size of 0.5 to 2 kb was higher than 90%. The construction of this library will provide a platform for the research of invasion mechanism and prevention.

Key words: Ascosphaera apis; full-length cDNA library; lambda phage

中图分类号:

S826.9⁺2

赵红霞;李江红;梁勤;罗岳雄;张学锋. 蜜蜂球囊菌全长cDNA文库的构建与分析[J]. , 2010, 37(3): 112-114.

ZHAO Hong-xia;LI Jiang-hong;LIANG Qin;LUO Yue-xiong;ZHANG Xue-feng. Construction and Analysis of a Full-length cDNA Library of Ascosphaera apis[J]. , 2010, 37(3): 112-114.

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