人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因对山羊胎儿成纤维细胞的影响

›› 2009, Vol. 36 ›› Issue (8): 42-46.

人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因对山羊胎儿成纤维细胞的影响

鲍珣，张拓，张涌

（西北农林科技大学动物医学院生物工程研究所，杨凌 712100）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-08-20 发布日期:2009-08-20
通讯作者: 张涌

The Influence of Human Telomerase Reverse Transcriptase Gene for Goat Fetal Fibroblast

BAO Xun, ZHANG Tuo, ZHANG Yong

(Institute of Biotechnology, Animal Medical College, Northwest Sci-Tech University of Agriculture and Forestry, Yangling 712100, China)

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-08-20 Published:2009-08-20
Contact: ZHANG Yong

摘要/Abstract

摘要： 利用包含人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因的真核表达载体pCI-neo-hTERT转染山羊胎儿成纤维细胞，筛选阳性克隆扩大培养，并对转染阳性细胞分别进行RT-PCR检测，倍性分析，细胞周期检测和细胞凋亡检测，以观察该基因对山羊胎儿成纤维细胞的影响。试验结果表明，筛选出的阳性细胞现已传至第50代；RT-PCR检测，端粒酶基因成功整合到山羊胎儿成纤维细胞并持续表达；倍性分析结果显示，转基因第50代细胞呈正常二倍体；对细胞周期进行分析，结果显示转基因第50代细胞较未转染第30代细胞有较高的S期，说明该细胞DNA合成旺盛，具有很强的增殖能力；细胞凋亡检测结果发现，转基因第50代细胞中凋亡细胞的比例明显少于转染第30代山羊胎儿成纤维细胞。这些试验结果均表明，hTERT能增加山羊胎儿成纤维细胞体外培养的代数，并保持细胞良好的形态及较强的增殖能力。

关键词: hTERT; 山羊; 胎儿成纤维细胞

Abstract: Transferred eukaryotic expressing vector pCI-neo-hTERT into goat fetal fibroblast, screened and amplified the positive clones for RT-PCR detection, DNA ploidy analysis, cell cycle detection and apoptosis detection, investigated the influence of hTERT gene for goat fetal fibroblast. The 50th generation of positive clones expressed hTERT. DNA ploidy analysis showed the clones were normal diploid. The result of cell cycle of positive cells showed that compared with normal untreated cells (30 passages), the positive cells (50 passages) had higher S period, which illustrated these cells had strong ability to DNA synthesis and propagation. The result of apoptosis detection showed that the apoptosis rate of positive cells (50 passages) is extremely lower than normal untreated goat fetal fibroblast (30 passages). These experiences all showed that hTERT could increase the generation quantity of goat fetal fibroblast in vitro culture, maintain these cells a good morphology and strong propagation ability.


Key words: hTERT; goat; fetal fibroblast

中图分类号:

S188

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