AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达

›› 2009, Vol. 36 ›› Issue (7): 63-66.

AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达

丁银巧^1,2，张文杰²，张云霞²，赵铁柱²，孙明²，遇秀玲²，赵德明¹，田克恭²

(1.中国农业大学动物医学院，北京 100193； 2.中国动物疫病预防控制中心兽医诊断室，北京 100193)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-07-20 发布日期:2009-07-20
通讯作者: 田克恭

Expression of Foot-and-mouth Disease Virus AsiaⅠVP1 Gene in Insect Cell／Baculovirus

DING Yin-qiao^1,2, ZHANG Wen-jie², ZHANG Yun-xia², ZHAO Tie-zhu², 
SUN Ming², YU Xiu-ling², ZHAO De-ming¹, TIAN Ke-gong²

(1.College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100193, China；2.Veterinary Diagnostic Lab of China Animal Disease Prevent and Control Center, Beijing 100193, China)

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-07-20 Published:2009-07-20
Contact: TIAN Ke-gong

摘要/Abstract

摘要： 利用杆状病毒表达系统对AsiaⅠ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)VP1基因在Sf9昆虫细胞中进行表达，为研究AsiaⅠ型FMDV VP1蛋白功能及建立AsiaⅠ型FMDV血清学诊断方法奠定基础。采用PCR方法从pGEM-T-Easy-AsiaⅠ型VP1质粒中扩增VP1基因，将其插入杆状病毒转座载体pFastBacHTA，构建的重组质粒pFastBacHTA-VP1再转入DH10Bac感受态细胞，经三重抗性与蓝白斑筛选，获得杆状病毒重组质粒Bacmid-VP 1，然后转染Sf9昆虫细胞。PCR鉴定证实VP1基因正确地插入到Bacmid中，成功构建了杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1，SDS-PAGE和Western-blotting检测结果表明,VP1基因在Sf9昆虫细胞中表达出约26.5 ku的VP1蛋白。将可溶性表达的融合蛋白用Ni-NTA亲和层析方法进行纯化，通过ELISA分析，能特异性地检测出AsiaⅠ型口蹄疫病毒阳性血清。AsiaⅠ型FMDV VP1基因在杆状病毒表达系统中的成功表达为AsiaⅠ型FMDV VP1蛋白的抗原性及血清学抗体水平检测研究奠定了基础。

关键词: AsiaⅠ型口蹄疫病毒; VP1基因; 杆状病毒; 真核表达

Abstract: VP1 gene of foot-and-mouth virus (FMDV) AsiaⅠ was expressed in insect cell/Baculovirus expression system to lay a foundation for research of FMDV AsiaⅠ VP1 protein function and serology diagnostic method. The gene VP1 was amplified from the recombinant plasmid of FMDV AsiaⅠ by PCR and inserted into Baculovirus vector pFastBacHTA to get recombinant plasmid pFastBacHTA-VP1. The recombinant plasmid pFastBacHTA-VP1 was transformed into DH10Bac and the VP1 gene was integrated into Bacmid by site-specific transposition. Subsequently, the recombinant Bacmid-VP1 was transfected into Sf9 insect cells. The expressed product was identified by SDS-PAGE and Western blotting. The soluble fusion protein was purified by Ni-NTA affinity chromatography. ELISA analysis showed that the protein purified was reactive with the positive serum against FMDV AsiaⅠ. The successful expression of FMDV AsiaⅠ VP1 gene in insect cell/Baculovirus expression system provide material for research of antigenicity of AsiaⅠ VP1 protein as well as the surveillance of serology antibody.

Key words: foot-and-mouth disease virus AsiaⅠ; VP1 gene; Baculovirus; eukaryotic expression

中图分类号:

丁银巧;张文杰;张云霞;赵铁柱;孙明;遇秀玲;赵德明;田克恭. AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达[J]. , 2009, 36(7): 63-66.

DING Yin-qiao;ZHANG Wen-jie;ZHANG Yun-xia;ZHAO Tie-zhu;SUN Ming;YU Xiu-ling;ZHAO De-ming;TIAN Ke-gong. Expression of Foot-and-mouth Disease Virus AsiaⅠVP1 Gene in Insect Cell／Baculovirus[J]. , 2009, 36(7): 63-66.

[1]	于吉锋, 谢晶, 黄勇, 肖璐, 林毅, 曹冶, 叶勇刚, 魏勇, 吴学婧, 李江凌, 康润敏. 密码子优化的RHDV2双VP60基因重组杆状病毒构建及表达蛋白免疫原性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(2): 668-677.
[2]	姜海军, 王丹, 郭禹, 韦莉, 侯磊, 王菁, 朱珊珊, 刘爵. 猪圆环病毒3型Cap重组鞭毛蛋白融合表达及其免疫原性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2044-2052.
[3]	段香媛, 武江利, 魏俏红, 冯毛. 蜂王浆主蛋白2在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3779-3786.
[4]	李双星, 刘业兵, 柳方远, 吉婧, 杜吉革, 李倩琳, 朱真, 李启红, 陈小云, 印春生. 猫传染性腹膜炎病毒N蛋白在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(1): 273-279.
[5]	王盛, 谢芝勋, 沈文康, 谢丽基, 范晴, 罗思思, 张艳芳, 曾婷婷, 黄娇玲, 张民秀, 谢志勤, 邓显文. 禽呼肠孤病毒σB和σC蛋白在昆虫细胞中的共表达[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(5): 1334-1341.
[6]	何海健, 吴瑗, 王鲁彦, 李群景, 巴少波, 石林, 邵春艳, 孙静, 姜胜, 王晓杜. PEDV分离株S1基因的重组杆状病毒真核表达[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(3): 832-839.
[7]	刘汉平. 猪O型口蹄疫病毒样颗粒的构建及鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2019, 46(11): 3350-3357.
[8]	陈美荣, 林伟东, 宋天琪, 鑫婷, 郭晓宇, 黄克和, 贾红. CDV强毒BJ16B2株H基因在昆虫杆状病毒中的表达与鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》, 2018, 45(8): 2041-2048.
[9]	徐国, 梁海英, 曾智勇, 王彬, 黄涛, 汤德元, 代振江, 叶百川, 张爱琼, 何小莉, 咸文. V5标记的猪圆环病毒2型Cap蛋白重组杆状病毒表达载体的构建[J]. 《中国畜牧兽医》, 2018, 45(7): 1775-1782.
[10]	吴靖, 许健, 黄秀芬, 沈俊俊, 何后军, 李永清. 抗牛传染性鼻气管炎病毒囊膜gD糖蛋白的单链抗体在昆虫细胞中表达及活性检测[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(8): 2475-2482.
[11]	孙朋. 基因Ⅶ型新城疫病毒F蛋白在昆虫细胞中的表达及免疫效力研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(6): 1840-1846.
[12]	谢三磊, 温书香, 罗琳, 马志宏, 李桂萍, 李铁梁, 姜娜, 邢薇, 孙惠玲. 传染性造血器官坏死病病毒糖蛋白杆状病毒表达系统的构建及其抗原性分析[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(3): 854-860.
[13]	薛忠, 董淑红, 王善辉. 小反刍兽疫病毒(PPRV)F基因在昆虫细胞中的分泌表达及免疫原性研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(11): 3327-3333.
[14]	吴植, 张继玲, 吴萌, 崔潇婷, 王安平. 输卵管特异表达人溶菌酶基因重组禽腺联病毒的构建及鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(10): 2871-2877.
[15]	郭慧娟, 樊翠, 张英, 吕茂杰, 梁武, 杨保收. 猪圆环病毒2型CAP蛋白在flashBAC杆状病毒表达系统中的表达与鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》---唯一指定的官方网站, 2016, 43(7): 1876-1883.