表达绿色荧光蛋白的伪狂犬基因缺失病毒的构建

›› 2009, Vol. 36 ›› Issue (1): 41-45.

表达绿色荧光蛋白的伪狂犬基因缺失病毒的构建

王鑫¹，李文刚²，吴凤笋²，魏娟¹，耿红娟¹，靳永健²

1.河南农业大学, 郑州 450002; 2.郑州牧业高等专科学校, 郑州 450011

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-01-20 发布日期:2009-01-20

Expression of Green Fluorescent Protein Gene Deletion Mutant of the Pseudorabies Virus Construction

WANG Xin¹，LI Wen-gang²，WU Feng-sun²， WEI Juan¹，GENG Hong-juan¹，JIN Yong-jian²

1.Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China;2.Zhengzhou Animal Husbandry Engineering College, Zhengzhou 450011, China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-01-20 Published:2009-01-20

摘要/Abstract

摘要： 通过酶切、补平、连接的方法对PUSK 载体质粒进行改造，消除了该载体上的BamHⅠ和HindⅢ两酶切位点。根据pAcGFP1C1基因序列设计1对引物，分别在上、下游引物的5′端引入了NotⅠ酶切位点，通过PCR扩增将目的基因AcGFP(包括GFP、CMV、MCS、SV40 Poly（A）)克隆入经改造的PUSK载体内，构建了转移载体质粒PUSG。利用脂质体介导的方法，将转移载体质粒PUSG与伪狂犬病病毒基因组DNA共转染PK15细胞。于荧光显微镜下48 h便能观察到绿色荧光，用吸管将有荧光的病变细胞吸出，经连续传代3次得到了纯化病毒。重组病毒的获得为下一步研制二价或多价疫苗的筛选提供了方便。

关键词: 伪狂犬病病毒; PUSK; gG基因; pAcGFP1C1; 转移载体; 表达

Abstract: Through digestion, filllinking method to transform PUSK vector to eliminate the vector of BamHⅠ and HindⅢ restriction sites. According pAcGFP1C1 gene sequencing to designe primers, in the upstream and downstream primers 5′end introduced NotⅠ restriction sites, will be amplified by PCR fluorescent protein gene AcGFP(including CMV, MCS, SV40 Poly (A)) cloned into the vector NotⅠ restriction sites of the PUSK. Use of lipidmediated method, vector plasmid PUSG and PRV genomic DNA transfection of PK15 cells. Green fluorescent will be observed in 48 hours under fluorescence microscopy. After three consecutive passages have been purified virus. The recombinant virus will be providing a convenient for the next two or trivalent vaccine selection.

Key words: pseudorabies virus; PUSK; gG gene; pAcGFP1C1; transfer vector; expression

中图分类号:

Q782

王鑫;李文刚;吴凤笋;魏娟;耿红娟;靳永健. 表达绿色荧光蛋白的伪狂犬基因缺失病毒的构建[J]. , 2009, 36(1): 41-45.

WANG Xin;LI Wen-gang;WU Feng-sun;WEI Juan;GENG Hong-juan;JIN Yong-jian. Expression of Green Fluorescent Protein Gene Deletion Mutant of the Pseudorabies Virus Construction[J]. , 2009, 36(1): 41-45.

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