水泡性口炎病毒N蛋白原核表达及免疫原性分析

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.09.008

《中国畜牧兽医》 ›› 2017, Vol. 44 ›› Issue (9): 2593-2597.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.09.008

水泡性口炎病毒N蛋白原核表达及免疫原性分析

张雪¹, 娄丽², 陈阳¹, 周晓丽¹, 刘钊¹, 贾赟¹, 孙颖杰³

1. 辽宁出入境检验检疫局, 大连 116001;
2. 丹东出入境检验检疫局, 丹东 118000;
3. 四川出入境检验检疫局, 成都 610000

收稿日期:2017-02-27 出版日期:2017-09-20 发布日期:2017-09-22
通讯作者: 贾赟, 孙颖杰 E-mail:jxy750921@163.com;sunyjciq@163.com
作者简介:张雪(1984-),女,辽宁大连人,硕士,兽医师,研究方向:生物工程,E-mail:zhangxue2624@163.com
基金资助:
十二五国家科技支撑计划"外来与新发动物疫病筛查与鉴定技术研究与示范"（2013BAD12B01）

Prokaryotic Expression and Immunogenicity Analysis of N Protein from Vesicular Stomatitis Virus

ZHANG Xue¹, LOU Li², CHEN Yang¹, ZHOU Xiao-li¹, LIU Zhao¹, JIA Yun¹, SUN Ying-jie³

1. Liaoning Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Dalian 116001, China;
2. Dandong Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Dandong 118000, China;
3. Sichuan Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Chengdu 610000, China

Received:2017-02-27 Online:2017-09-20 Published:2017-09-22

摘要/Abstract

摘要：

本研究旨在克隆和表达水泡性口炎病毒（vesicular stomatitis virus，VSV）特异性抗原N蛋白，进而纯化并分析其免疫原性。根据GenBank中已发表的VSV基因组N基因序列，分别合成VSV两种不同血清型的N基因，经序列对比分析后，设计合成1对特异性引物，PCR扩增获得约1 300 bp的N基因片段，将目的片段亚克隆至pCold Ⅰ原核表达载体中，经IPTG诱导表达后，采用Ni-NTA树脂亲和层析法纯化重组N蛋白。SDS-PAGE分析表明，N基因在大肠杆菌中得到表达，蛋白大小约为50 ku；Western blotting检测结果表明，该重组蛋白与VSV多克隆抗体发生特异性反应。本试验成功构建了VSV-IND和VSV-NJ的原核表达载体，实现了N蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达，纯化后的重组蛋白具有良好的免疫原性。

关键词: 水泡性口炎病毒(VSV); N蛋白; 原核表达

Abstract:

This study was aimed to clone and express the specific antigen nucleoprotein (N) of vesicular stomatitis virus (VSV), and then purify and analyze its immunogenicity. Based on published VSV genome N gene sequence in GenBank, two kinds of N genes of VSV with different serotypes were synthesized, respectively. After sequence analysis, one pair of specific primers was designed and synthesized, N gene fragment with about 1 300 bp length was amplified by PCR, and subcloned into pCold Ⅰ expression vector. The recombinant N protein was induced with IPTG and purified by Ni-NTA. The results of SDS-PAGE showed that the N gene was successfully expressed in E. coli and the molecular weight of protein was 50 ku; The results of Western blotting showed that this recombined protein specifically reacted with polyclonal antibody serum of VSV. The recombinant vector with VSV-IND and VSV-NJ were successfully constructed, and the N protein was solubly expressed in E. coli, and the purified protein demonstrated promising immunogenicity.

Key words: vesicular stomatitis virus (VSV); N protein; prokaryotic expression

中图分类号:

S852.65

张雪, 娄丽, 陈阳, 周晓丽, 刘钊, 贾赟, 孙颖杰. 水泡性口炎病毒N蛋白原核表达及免疫原性分析[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(9): 2593-2597.

ZHANG Xue, LOU Li, CHEN Yang, ZHOU Xiao-li, LIU Zhao, JIA Yun, SUN Ying-jie. Prokaryotic Expression and Immunogenicity Analysis of N Protein from Vesicular Stomatitis Virus[J]. , 2017, 44(9): 2593-2597.

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Prokaryotic Expression and Immunogenicity Analysis of N Protein from Vesicular Stomatitis Virus

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