羊口疮病毒ORF059基因的真核表达研究

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.09.011

《中国畜牧兽医》 ›› 2016, Vol. 43 ›› Issue (9): 2291-2295.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.09.011

羊口疮病毒ORF059基因的真核表达研究

朱姝, 庞峰, 李国华, 李亚颖, 彭冬梅, 杨小健, 聂鑫, 曹瑞勇, 王凤阳, 杜丽

海南大学农学院, 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室, 海口市动物基因工程重点实验室, 海口 570228

收稿日期:2016-05-27 出版日期:2016-09-20 发布日期:2016-09-20
通讯作者: 杜丽 E-mail:kych2008dl@163.com
作者简介:朱姝(1992-),女,江苏镇江人,硕士生,研究方向:动物功能基因组学,E-mail:2316955066@qq.com
基金资助:
海南省重大科技计划项目（ZDKJ2016017-01）

Study on Eukaryotic Expression of ORF059 Gene of Orf Virus

ZHU Shu, PANG Feng, LI Guo-hua, LI Ya-ying, PENG Dong-mei, YANG Xiao-jian, NIE Xin, CAO Rui-yong, WANG Feng-yang, DU Li

Key Laboratory of Animal Genetic Engineering of Haikou City, Key Laboratory of Tropical Animal Reproduction & Breeding and Epidemic Disease Reseach of Hainan Province, College of Agriculture, Hainan University, Haikou 570228, China

Received:2016-05-27 Online:2016-09-20 Published:2016-09-20

摘要/Abstract

摘要：

试验旨在扩增羊口疮病毒（Orf virus，ORFV）ORF059基因并进行真核表达。提取羊ORFV HCE弱毒株基因组为模板，参照GenBank上ORF059的基因序列，利用DNAMAN设计引物，应用PCR扩增ORF059目的片段，凝胶回收后将其连入pEGFP-N1质粒，构建重组质粒pEGFP-ORF059-N1，测序正确后瞬时转染NIH3T3细胞，应用荧光显微镜观察，Western blotting鉴定融合蛋白的表达。结果表明，ORF059基因片段大小为1 005 bp；重组质粒pEGFP-ORF059-N1构建正确；转染pEGFP-ORF059-N1的NIH3T3细胞有明显的绿色荧光；表达的融合蛋白大小约为64 ku。本试验结果为进一步研究ORF059的作用机理奠定了基础。

关键词: 羊口疮病毒; ORF059基因; 真核表达; NIH3T3细胞

Abstract:

The study was aimed to clonie and express ORF059 gene of Orf virus (ORFV).The genome of ORFV HCE attenuated vaccine strain was extracted and used as the template.Based on the referenced gene sequences of ORF059 gene on GenBank,the specific primers were designed,the fragment of ORF059 gene was amplified by PCR.After being purified,ORF059 gene was inserted into pEGFP-N1 vector to construct recombinant plasmid pEGFP-ORF059-N1.After being sequenced,the recombinant plasmid pEGFP-ORF059-N1 was transfected into NIH3T3 cells with liposomes.The expression of fusion protein was identified by the fluorescence microscope observation and Western blotting.The results showed that the ORF059 gene was 1 005 bp.The recombinant plasmid pEGFP-ORF059-N1 was constructed correctly.Green fluorescence could be observed in NIH3T3 cells transfected by pEGFP-ORF059-N1 under the fluorescence microscope.The expressed fusion protein was about 64 ku.The results laid a foundation for the further research on the mechanism of ORF059.

Key words: ORFV; ORF059 gene; eukaryotic expression; NIH3T3 cell

中图分类号:

Q786

朱姝, 庞峰, 李国华, 李亚颖, 彭冬梅, 杨小健, 聂鑫, 曹瑞勇, 王凤阳, 杜丽. 羊口疮病毒ORF059基因的真核表达研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2016, 43(9): 2291-2295.

ZHU Shu, PANG Feng, LI Guo-hua, LI Ya-ying, PENG Dong-mei, YANG Xiao-jian, NIE Xin, CAO Rui-yong, WANG Feng-yang, DU Li. Study on Eukaryotic Expression of ORF059 Gene of Orf Virus[J]. , 2016, 43(9): 2291-2295.

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羊口疮病毒ORF059基因的真核表达研究

Study on Eukaryotic Expression of ORF059 Gene of Orf Virus

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