核苷二磷酸激酶B稳定表达细胞系的建立及其对新城疫病毒F48E9株复制的影响

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.08.010

《中国畜牧兽医》 ›› 2017, Vol. 44 ›› Issue (8): 2283-2288.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.08.010

核苷二磷酸激酶B稳定表达细胞系的建立及其对新城疫病毒F48E9株复制的影响

郭育培¹, 班付国¹, 闫若潜¹, 方先珍¹, 丁壮²

1. 河南省动物疫病预防控制中心, 郑州 450008;
2. 吉林大学动物医学学院, 长春 130062

收稿日期:2017-01-09 出版日期:2017-08-20 发布日期:2017-08-18
通讯作者: 丁壮 E-mail:dingzhuang@jlu.edu.cn
作者简介:郭育培(1987-),男,河南郑州人,硕士,助理兽医师,研究方向:动物疫病监测与预警,E-mail:guoyupei2006@163.com
基金资助:
河南省科技创新人才计划项目（豫科人组[2011]1号）

Establishment of a Stable Expression Cell Line of Nucleoside Diphosphate Kinase B and Its Influence on Replication of F48E9 Strain of Newcastle Disease Virus

GUO Yu-pei¹, BAN Fu-guo¹, YAN Ruo-qian¹, FANG Xian-zhen¹, DING Zhuang²

1. Henan Center for Animal Disease Control and Prevention, Zhengzhou 450008, China;
2. College of Animal Medicine, Jilin University, Changchun 130062, China

Received:2017-01-09 Online:2017-08-20 Published:2017-08-18

摘要/Abstract

摘要：

为研究核苷二磷酸激酶B（nucleoside diphosphate kinase B，NDPK B）蛋白表达对新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV） F48E9株复制与增殖的影响，本试验将真核表达重组质粒pEGFP-NDPK B转染Vero细胞，经G418压力筛选出了阳性细胞单克隆，并通过RT-PCR、Western blotting和倒置荧光显微镜观察鉴定了NDPK B mRNA和蛋白质的表达，在细胞系基础上，通过HA-HI、TCID₅₀及实时荧光定量PCR检测NDPK B蛋白对NDV F48E9株复制和增殖的影响。结果表明，试验成功地构建了高表达NDPK B蛋白的Vero/NDPK B细胞系，并在此基础上，通过检测证明了NDPK B能抑制NDV F48E9株在Vero细胞中的复制与增殖，提示以NDPK B为基础有可能设计开发抗NDV的新药物或抗病毒增效剂，对NDV进行预防或治疗。

关键词: 核苷二磷酸激酶B; 表达; 新城疫病毒; 复制与增殖

Abstract:

In order to explore the influence of nucleoside diphosphate kinase B (NDPK B) on replication and proliferation of F48E9 strain of Newcastle disease virus (NDV), the eukaryotic expression plasmid pEGFP-NDPK B was transfected into Vero cells,then we got the cell subclones by G418 screening. We identified the expression of NDPK B protein by RT-PCR, Western blotting and inverted flurescence microscope. On the basis of Vero/NDPK B cell line,we explored the influence of NDPK B on replication and proliferation of F48E9 strain of NDV by HA-HI, TCID₅₀ and Real-time PCR.The results showed that we had successfully constructed the cell line named Vero/NDPK B, which could stably express NDPK B protein, and found that NDPK B could inhibit the replication and proliferation of F48E9 strain of NDV in Vero cells.It suggested that on the basis of NDPK B,we could design and develop new drugs or antiviral synergist to prevent or treat NDV.

Key words: nucleoside diphosphate kinase B (NDPK B); expression; Newcastle disease virus (NDV); replication and proliferation

中图分类号:

S852.2

郭育培, 班付国, 闫若潜, 方先珍, 丁壮. 核苷二磷酸激酶B稳定表达细胞系的建立及其对新城疫病毒F48E9株复制的影响[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(8): 2283-2288.

GUO Yu-pei, BAN Fu-guo, YAN Ruo-qian, FANG Xian-zhen, DING Zhuang. Establishment of a Stable Expression Cell Line of Nucleoside Diphosphate Kinase B and Its Influence on Replication of F48E9 Strain of Newcastle Disease Virus[J]. , 2017, 44(8): 2283-2288.

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