蓝舌病1型病毒VP2蛋白的原核表达及免疫反应性分析

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.07.030

《中国畜牧兽医》 ›› 2017, Vol. 44 ›› Issue (7): 2119-2125.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.07.030

蓝舌病1型病毒VP2蛋白的原核表达及免疫反应性分析

宋建领, 李华春

云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室, 昆明 650224

收稿日期:2016-12-12 出版日期:2017-07-20 发布日期:2017-07-22
通讯作者: 李华春 E-mail:li_huachun@hotmail.com
作者简介:宋建领(1974-),男,山东单县人,硕士,研究员,研究方向:动物传染病,E-mail:jianling_song@hotmail.com
基金资助:
国家自然科学基金（31260612）；公益性行业（农业）科研专项（201303035）

Prokaryotic Expression and Immunoreactivity Analysis of VP2 Protein of Bluetongue Virus Serotype 1

SONG Jian-ling, LI Hua-chun

Yunnan Tropical and Subtropical Animal Virus Diseases Laboratory, Kunming 650224, China

Received:2016-12-12 Online:2017-07-20 Published:2017-07-22

摘要/Abstract

摘要：

试验旨在研究蓝舌病1型病毒（bluetongue virus serotype 1，BTV-1） VP2蛋白体外表达产物免疫反应性。根据已发表的BTV-1 Y863毒株L2基因序列设计合成特异性BTV-1 PCR引物，通过RT-PCR方法扩增L2基因，将纯化的L2基因克隆至pEASY-Blunt E1表达载体，对重组质粒进行鉴定，将阳性重组质粒L2克隆至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞进行表达，对获得的纯化的BTV-1 VP2重组蛋白进行Western blotting、ELISA、阻断ELISA分析。结果显示，BTV-1 VP2蛋白在pEASY-Blunt E1载体上以包涵体形式表达，通过Ni-NTA亲和层析，160和200 mmol/L咪唑是洗脱BTV-1 VP2蛋白表达产物的最佳浓度。纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的BTV-1 VP2重组蛋白，分子质量约105 ku，Western blotting、ELISA、阻断ELISA结果显示，重组BTV-1 VP2蛋白能与BTV-1型特异性抗体发生特异性结合，且此结合能被BTV-1阻断。本试验结果表明，通过原核表达载体pEASY-Blunt E1表达的BTV-1 VP2重组蛋白具有良好的免疫反应性，为BTV-1 VP2蛋白型特异性表位定位研究奠定了基础。

关键词: 蓝舌病; VP2蛋白; 表达; 免疫反应性

Abstract:

The study was aimed to test the immunoreactivity of the VP2 protein of bluetongue virus serotype 1 (BTV-1) in vitro. Based on the published BTV-1 L2 gene of Y863 strain, specific cloning PCR primers were designed and synthesized. The L2 gene was amplified through RT-PCR method and then was purified and cloned into the expressing vector pEASY-Blunt E1. The cloned recombinant plasmids were identified. The positive recombinant L2 plasmid was cloned into BL21(DE3) competent cells to express VP2 protein. The acquired purified recombinant BTV-1 VP2 protein was analyzed through the methods of Western blotting, ELISA and blocking ELISA. The results showed that:BTV-1 VP2 protein was expressed as the inclusion bodies in the pEASY-Blunt E1 vector; 160 and 200 mmol/L glyoxaline were the best condition to wash down the expressed protein. The molecular weight of this purified recombinant protein with N-terminal His-tag was about 105 ku. Through the results of Western blotting, ELISA and blocking ELISA, it had been proved that this recombinant protein could combine with BTV-1 specific antibody and this combination could be blocked by BTV-1 virus. The study showed that the recombinant BTV-1 VP2 protein, expressed through the prokaryotic expression vector pEASY-Blunt E1, possessed good immunoreactivity and this study had established foundation for locating the serotypic epitopes of the BTV-1 VP2 protein.

Key words: bluetongue; VP2 protein; expression; immunoreactivity

中图分类号:

S852.65

宋建领, 李华春. 蓝舌病1型病毒VP2蛋白的原核表达及免疫反应性分析[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(7): 2119-2125.

SONG Jian-ling, LI Hua-chun. Prokaryotic Expression and Immunoreactivity Analysis of VP2 Protein of Bluetongue Virus Serotype 1[J]. , 2017, 44(7): 2119-2125.

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蓝舌病1型病毒VP2蛋白的原核表达及免疫反应性分析

Prokaryotic Expression and Immunoreactivity Analysis of VP2 Protein of Bluetongue Virus Serotype 1

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