绵羊肺炎支原体p60蛋白N端与C端的表达及其免疫学特性研究

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.02.010

《中国畜牧兽医》 ›› 2017, Vol. 44 ›› Issue (2): 371-376.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.02.010

绵羊肺炎支原体p60蛋白N端与C端的表达及其免疫学特性研究

麻昌姣, 郑佳琪, 黄海碧, 王晓晖, 白帆, 郝永清

内蒙古农业大学兽医学院微生物与免疫实验室, 呼和浩特 010018

收稿日期:2016-07-21 出版日期:2017-02-20 发布日期:2017-02-25
通讯作者: 郝永清 E-mail:haoyq1960@163.com
作者简介:麻昌姣(1991-), 女, 黑龙江齐齐哈尔人, 硕士生, 研究方向:兽医微生物与免疫学, E-mail:825133497@qq.com
基金资助:
内蒙古自治区科技计划"舍饲肉羊疫病动态防控关键技术研究"（201502070）；国家科技支撑计划"重点牧区"生产生态生活"保障技术集成与示范"（2012BAD13B00）

Expression of N-terminal Domain and C-terminal Domain of Mycoplasma ovipneumoniae p60 Protein and Initial Identification on Their Immunologic Activity

MA Chang-jiao, ZHENG Jia-qi, HUANG Hai-bi, WANG Xiao-hui, BAI Fan, HAO Yong-qing

Laboratory of Microbiology and Immunology, College of Veterinary Medicine, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, China

Received:2016-07-21 Online:2017-02-20 Published:2017-02-25

摘要/Abstract

摘要：

为分析绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae，MO）膜表面脂蛋白p60的免疫学特性，本研究分别扩增p60蛋白N端与C端的基因，并通过重叠延伸PCR将C端基因序列中的TGA（1 459－1 461 bp）定点突变为同义密码子TGG。将扩增的基因片段分别插入到pET-32a（+）表达载体上，重组质粒分别转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中进行诱导表达，得到分子质量约57 ku的p60-N蛋白和分子质量约为30.5 ku的p60-C蛋白；再对纯化后的重组蛋白进行 Western blotting 分析，结果表明重组蛋白均可与MO阳性血清发生特异性免疫学反应，表明表达的重组蛋白p60-N和p60-C均有良好的反应原性。本研究为筛选MO主要的免疫原性蛋白和建立特异的血清学诊断方法提供了依据。

关键词: 绵羊肺炎支原体; p60蛋白; 表达

Abstract:

In order to analyze the immunological characteristics of lipid-associated membrane protein p60 of Mycoplasma ovipneumoniae, we cloned the N-terminal part and C-terminal part of p60 gene by PCR separately. The overlap-extension PCR was used to mutagenate nucleotides TGA (1 459－1 461 bp) to TGG. Then the PCR product was inserted to the pET-32a(+) plasmid for expression in E.coli BL21(DE3). The purified recombinant protein was analyzed by SDS-PAGE, and the recombinant N-terminal domain of p60 protein was successfully expressed with a mass of molecule of 57 ku, and a molecular of 30.5 ku of the N-terminal domain of p60 protein. Western blotting revealed that the two kinds of proteins could specifically react with positive serum, which confirmed that the recombinant N-terminal domain of p60 protein and the recombinant C-terminal domain of p60 protein both had a good reactionogenicity. This study could provide an effective reference data for screening important immunogenicity protein and establishment available diagnosis methods.

Key words: Mycoplasma ovipneumoniae; p60 protein; expression

中图分类号:

S852.62

麻昌姣, 郑佳琪, 黄海碧, 王晓晖, 白帆, 郝永清. 绵羊肺炎支原体p60蛋白N端与C端的表达及其免疫学特性研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(2): 371-376.

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Expression of N-terminal Domain and C-terminal Domain of Mycoplasma ovipneumoniae p60 Protein and Initial Identification on Their Immunologic Activity

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