转双基因(pGH/IGF-Ⅰ)猪胎儿成纤维细胞系的建立及鉴定

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.08.018

《中国畜牧兽医》 ›› 2016, Vol. 43 ›› Issue (8): 2053-2059.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.08.018

转双基因(pGH/IGF-Ⅰ)猪胎儿成纤维细胞系的建立及鉴定

李晓玲, 于光辉, 孙金海

青岛农业大学动物科技学院, 青岛 266109

收稿日期:2016-02-15 出版日期:2016-08-20 发布日期:2016-08-23
通讯作者: 孙金海 E-mail:sunjinhai00528@sina.com
作者简介:李晓玲(1992-),女,山东临沂人,硕士生,研究方向:分子遗传与动物育种,E-mail:18765905961@163.com
基金资助:
国家转基因生物新品种培育科技重大专项（2014ZX08006-003）；山东省现代农业产业技术体系生猪创新团队建设项目（SDAIT-06-022-02）

Establishment and Identification of a Fetal Fibroblast Cell Line with Double Transgenic (pGH/IGF-Ⅰ) Porcine

LI Xiao-ling, YU Guang-hui, SUN Jin-hai

College of Animal Science and Technology, Qingdao Agriculture University, Qingdao 266109, China

Received:2016-02-15 Online:2016-08-20 Published:2016-08-23

摘要/Abstract

摘要：

本研究旨在建立转双基因（pGH/IGF-Ⅰ）猪胎儿成纤维细胞系，保存转双基因猪的成纤维细胞以便于后续细胞水平研究。试验采用胰蛋白酶消化法对猪胎儿躯干组织进行原代培养，通过原代培养、细胞传代、冷冻保存等成功分离出转双基因猪胎儿成纤维细胞，并对细胞进行了形态学观察、冻存前和复苏后细胞活力检测、生长动力学分析、波形蛋白免疫组化及微生物污染检测等生物学特性分析。结果显示，原代细胞经过胰蛋白酶消化和差速离心分离培养出成纤维细胞，冻存前细胞活力为94.3%，冻存3个月后细胞复苏后活力为91.2%；细胞生长总趋势呈“S”型，经历了潜伏期、指数生长期和平台期3个阶段；细胞波形蛋白在成纤维细胞中呈阳性反应；细胞的细菌、真菌、病毒和支原体检测均为阴性。结果表明本试验成功建立了转双基因猪成纤维细胞系。

关键词: 转双基因猪; 成纤维细胞系; 细胞培养; 生物学特性

Abstract:

This study was aimed to establish a fetal fibroblast cell line of double transgenic (pGH/IGF-Ⅰ) pigs,and reserve fibroblast cells of double transgenic pigs for the follow-up study.A method of trypsin digestion was adopted to isolate and culture body tissues from pregnant porcine,and porcine fetal fibroblasts were isolated successfully through primary culture,subculturing and cryopreservation.The morphological observation,determination of viability before cryopreservation and after recovery,dynamic growth analysis,vimentin immunohistochemistry and microbial contamination detection were all done to study the biological characteristics of the cell line.The results showed that the fibroblasts were cultured and isolated successfully by trypsin digestion and differential centrifugation.The cell viability before cryopreservation and after recovery were 94.3% and 91.2%,respectively.The growth curve was sigmoidal,and experienced the incubation period,exponential growth period and platform three stages.The vimentin immunohistochemistry was positive,the microbial contamination detection were all negative.The results indicated that a fibroblast cell line of double transgenic porcine was successfully established.

Key words: double transgenic porcine; fibroblast cell line; cell culture; biological characteristics

中图分类号:

Q343.6

李晓玲, 于光辉, 孙金海. 转双基因(pGH/IGF-Ⅰ)猪胎儿成纤维细胞系的建立及鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》, 2016, 43(8): 2053-2059.

LI Xiao-ling, YU Guang-hui, SUN Jin-hai. Establishment and Identification of a Fetal Fibroblast Cell Line with Double Transgenic (pGH/IGF-Ⅰ) Porcine[J]. , 2016, 43(8): 2053-2059.

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Establishment and Identification of a Fetal Fibroblast Cell Line with Double Transgenic (pGH/IGF-Ⅰ) Porcine

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