牛骨骼肌卫星细胞的分离鉴定和诱导分化

中国畜牧兽医

牛骨骼肌卫星细胞的分离鉴定和诱导分化

王轶敏¹^，2，代阳²，刘新峰²，刘中伟²，李吉霞²，郭宏²，丁向彬²

1.西北农林科技大学生物工程研究所，陕西杨凌 712100；2.天津农学院动物科学与动物医学学院，天津 300384

收稿日期:2013-12-17 出版日期:2014-07-20 发布日期:2014-08-21
通讯作者: 丁向彬（1978—），男，河南人，博士，副教授，研究方向：动物胚胎工程与繁殖生物技术。E-mail: xiangbinding@163.com
作者简介:王轶敏（1980—），女，陕西人，硕士，讲师，研究方向：发育生物学。
基金资助:
国家自然科学基金（31201021）；天津市自然科学基金（13JCQNJC14600）。

Isolation, Identification and Induced Differentiation of Bovine Skeletal Muscle Satellite Cells

WANG Yi-min¹^，2, DAI Yang², LIU Xin-feng², LIU Zhong-wei², LI Ji-xia²,GUO Hong², DING Xiang-bin²

1.Institute of Bioengineering, Northwest A&F University, Yangling 712100, China；2. College of Animal Science and Veterinary Medicine, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China

Received:2013-12-17 Online:2014-07-20 Published:2014-08-21

摘要/Abstract

摘要： 本研究对牛骨骼肌卫星细胞进行体外分离培养、诱导分化和鉴定，采用胶原酶和胰酶联用的酶消化法分离肌卫星细胞，应用差速贴壁法进行纯化，观察卫星细胞及诱导分化后肌管的形态结构，并利用标志基因的反转录PCR（RT-PCR）和免疫荧光染色方法对分化前后细胞进行鉴定。结果显示，分离出的肌卫星细胞呈梭形生长，生长状态良好，RT-PCR和免疫荧光染色显示肌卫星细胞Pax7和MyoD呈阳性表达，纯化后的肌卫星细胞纯度大于93%；诱导分化后，卫星细胞融合生长，形成的肌管状态良好，分化标志基因MyoG和MHC呈阳性表达。本研究建立了一套从牛肌肉组织中分离和鉴定肌卫星细胞的方法，可以为肌肉的发育分化和肉牛肉质改良研究提供良好的细胞模型。

关键词:

牛; 骨骼肌卫星细胞; 细胞培养; 细胞分化; 鉴定

Abstract: In this study, bovine skeletal muscle satellite cells were isolated and identified, muscle tissues were digested by collagenase and trypsinase, then the satellite cells were purified and induced differentiate into myotubes. The muscle satellite cells and myotubes were observed, and detected by RT-PCR and immunofluorescent staining technology. The results showed that the muscle satellite cells were in healthy morphology, and more than 93 percent of the cells expressed the marker genes paired box protein 7(Pax7) and myogenic differentiation antigen(MyoD). After myogenesis induction, satellite cells began to convergence, and finally formed multinucleated myotubes expression of myogenin(MyoG) and myosin heavy chain(MHC). Our results indicated that high purity skeletal muscle satellite cells were successfully isolated and identification, which could provide cell source for muscle development and bovine muscle quality improvement study.

Key words:

bovine; skeletal muscle satellite cells; cell culture; cell differentiation; identification

王轶敏，代阳，刘新峰，刘中伟，李吉霞，郭宏，丁向彬. 牛骨骼肌卫星细胞的分离鉴定和诱导分化[J]. 中国畜牧兽医.

WANG Yi-min, DAI Yang, LIU Xin-feng, LIU Zhong-wei, LI Ji-xia,GUO Hong, DING Xiang-bin. Isolation, Identification and Induced Differentiation of Bovine Skeletal Muscle Satellite Cells[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine.

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