绵羊肺炎支原体热休克蛋白Hsp70的生物信息学分析

中国畜牧兽医

绵羊肺炎支原体热休克蛋白Hsp70的生物信息学分析

张双翔¹，程振涛²^，3，唐宇¹，冉隆仲¹，李涛¹，周碧君²^，3，文明^2，3，王开功^2，3，王慧²

1.贵州省动物疫病预防控制中心，贵州贵阳 550008；2.贵州大学动物科学学院，贵州贵阳 550025；3.贵州省动物疫病研究室，贵州贵阳 550025

收稿日期:2013-12-16 出版日期:2014-07-20 发布日期:2014-08-21
通讯作者: 程振涛。Tel: 0851-8298078；E-mail: chengzhentao@sohu.com
作者简介:张双翔（1987—），男，陕西人，硕士，助理兽医师，研究方向：动物传染病。
基金资助:
黔西南州种草养羊产业发展省州科技合作专项项目(黔西南科合［2012］5号)；贵州省自然科学技术基金(黔科合J字［2011］2332号)；贵州省农业科技攻关项目（黔科合NY字［2011-3105］号）；贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室培育（黔科合计Z字［2011］4008号）；贵州省重大科技专项计划资助项目(黔科合重大专项字［2011］6009号）。

Bioinformatics Analysis of Hsp70 Gene of Mycoplasma ovipneumoniae

ZHANG Shuang-xiang¹，CHENG Zhen-tao²^，3，TANG Yu¹，RAN Long-zhong¹，LI Tao¹，ZHOU Bi-jun²^，3，WEN Ming²^，3，WANG Kai-gong²^，3，WANG Hui²

1.Animal Disease Prevention and Control Center in Guizhou Province,Guiyang 550008,China;2.College of Animal Science,Guizhou University,Guiyang 550025,China;3.Laboratory for Animal Disease of Guizhou,Guiyang 550025,China

Received:2013-12-16 Online:2014-07-20 Published:2014-08-21

摘要/Abstract

摘要： 本试验旨在了解绵羊肺炎支原体（Mo）标准Y98株Hsp70基因生物学特性，以期利用该基因表达蛋白建立ELISA方法。本研究应用DNAStar、Bioedit 7.0、ClustalX 3.0、Mega 4.0软件与Protparam、TMpred、IEDB在线工具对Hsp70蛋白的理化参数、跨膜结构、信号肽、二级结构、B细胞表位及与其他支原体Hsp70蛋白进化关系进行了比对分析。结果显示，Mo Y98株Hsp70蛋白理论分子质量为66.14 ku，pI值为5.08，为稳定的可溶性蛋白。该蛋白无跨膜结构，不分泌信号肽，存在多处具有免疫原性的肽段，具有形成抗原表位的优势结构，是建立免疫学方法较为理想的靶蛋白。与多种支原体Hsp70基因进化关系分析结果表明，该蛋白与Mo进化关系最近，与丝状支原体簇成员亲缘关系较远，为进一步分析Mo致病机理提供了理论依据。

关键词: font-size: 10.5pt; mso-bidi-font-family: 'Times New Roman'; mso-bidi-font-size: 12.0pt; mso-font-kerning: 1.0pt; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: ZH-CN; mso-bidi-language: AR-SA">绵羊肺炎支原体；Hsp70基因；生物信息学；分析

Abstract: The assay was aimed to establish the ELISA by Mycoplasma ovipneumoniae(Mo) strain Y98 Hsp70 protein which biological characteristics should be analyzed.The physical and chemical parameters,transmembrane,signal peptide,secondary structure,B cell epitopes were predicted and analyzed by DNAStar,Bioedit 7.0,ClustalX 3.0,Mega 4.0 softwares and Protparam,TMpred,IEDB online tools in this study. The results showed that the Hsp70 protein of Mo strain Y98 was stable and soluble which predicted molecular weight was 66.14 ku and pI was 5.08. The protein had no transmembrane and did not secrete signal peptide. It was also proved that the protein was ideal target protein to establish immune method due to the advantage structure of epitope existed. It was indicted that the evolutionary relationships between Mo and Mycoplasma hyopneumoniae was close which was far compared with Mycoplasma mycoides cluster by constructed phylogenetic trees of Hsp70 gene. It would provide theoretical basis to analyze pathogenesis of Mo further.

Key words: font-size: 10.5pt; mso-bidi-font-family: 'Times New Roman'; mso-bidi-font-size: 12.0pt; mso-font-kerning: 1.0pt; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: ZH-CN; mso-bidi-language: AR-SA" lang="EN-US">Mycoplasma ovipneumoniaefont-size: 10.5pt; mso-bidi-font-family: 宋体; mso-bidi-font-size: 12.0pt; mso-font-kerning: 1.0pt; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: ZH-CN; mso-bidi-language: AR-SA">；font-size: 10.5pt; mso-bidi-font-family: 'Times New Roman'; mso-bidi-font-size: 12.0pt; mso-font-kerning: 1.0pt; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: ZH-CN; mso-bidi-language: AR-SA" lang="EN-US">Hspfont-size: 10.5pt; mso-bidi-font-family: 'Times New Roman'; mso-bidi-font-size: 12.0pt; mso-font-kerning: 1.0pt; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: ZH-CN; mso-bidi-language: AR-SA" lang="EN-US">70 genefont-size: 10.5pt; mso-bidi-font-family: 'Times New Roman'; mso-bidi-font-size: 12.0pt; mso-font-kerning: 1.0pt; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: ZH-CN; mso-bidi-language: AR-SA">；bioinformatics；analysis

张双翔，程振涛，唐宇，冉隆仲，李涛，周碧君，文明，王开功，王慧. 绵羊肺炎支原体热休克蛋白Hsp70的生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医.

ZHANG Shuang-xiang，CHENG Zhen-tao，TANG Yu，RAN Long-zhong，LI Tao，ZHOU Bi-jun，WEN Ming，WANG Kai-gong，WANG Hui. Bioinformatics Analysis of Hsp70 Gene of Mycoplasma ovipneumoniae[J]. .

参考文献

1 马春骥, 杨旭.利用生物信息学技术分析结膜支原体Hsp70基因［J］.科技信息，2010(29):463～465.
2 马春骥，李敏，赵东，等. 绵羊肺炎支原体Y98株未知基因Hsp70（DnaK）的克隆［J］.中国兽医学报，2011，31(12):1733～1738.
3 刘劼，吴移谋.支原体基因组学研究进展［J］.中国人兽共患病学报，2006，22(11):1073～1077.
4 刘茂军，丁志勇，刘冬霞，等.猪肺炎支原体DnaK基因的表达及ELISA方法建立［J］.金陵科技学院学报，2011，27(4):79～84.
5 刘春英，李方正.猪输卵管特异性糖蛋白结构与功能的生物信息学分析［J］.中国畜牧兽医，2013，40(8):20～25.
6 许健，储岳峰，高鹏程，等.绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae）丙酮酸脱氢酶E1-α亚单位基因（pdha）的克隆、表达及其免疫学活性测定［J］.农业生物技术学报，2012，20(3):275～282.
7 张玲，郝永清，徐春光，等.丝状支原体山羊亚种脂蛋白LPPA基因的定点突变及原核表达［J］.畜牧与兽医，2013，45(10):74～76.
8 李媛，陶岳，阿依吐拉·肉孜，等.从湖羊肺脏中分离绵羊肺炎支原体的鉴定［J］.中国预防兽医学报，2006，7(4):375～379.
9 杨发龙，张焕容，汤承，等. 绵羊肺炎支原体p113基因的序列分析及功能预测［J］. 华南农业大学学报，2013a，34(1):117～121.
10 杨发龙，张贤宇，汤承，等.绵羊肺炎支原体P113蛋白C端重复区的表达及其免疫原性［J］.中国兽医科学，2013b，43(7):733～737.
11 胡景韶，蒋学良，胡诚隆，等.一种由支原体感染的绵羊增生性间质性肺炎的研究［J］.中国兽医杂志，1982，5:2～6.
12 赵东，马春骥，李敏，等.绵羊肺炎支原体与猪肺炎支原体交叉抗原研究［J］.黑龙江畜牧兽医，2011，8:155～156.
13 赵红艳，刘文青，车腾飞，等.绵羊肺炎支原体Y98 P30基因的克隆、表达及免疫试验［J］.中国兽医学报，2012，32(3):397～405.
14 唐媛，李春花，张瑗，等.蛋白质的二级结构预测研究进展［J］.现代生物医学进展，2013，13(26):5180～5182.
15 曾燕群，钟武，李松.热休克蛋白70 及其抑制剂的研究进展［J］.国际药学研究杂志，2011，38(4):263～269.
16 Balikci E,Kizil O,Karapinar T,et al.Efficacy of marbofloxacin for naturally occurring contagious caprine pleuropneumonia［J］.Small Ruminant Research,2008,77:75～79.
17 Kinjo A R,Nakamura H.Composite structural motifs of binding sites for delineating biological functions of proteins［J］.PLoS One,2012,7(2):e31437.
18 Mackay J M K,Nisbet D I,Foggie A.Isolation of pleuropneumonia-like organisms(Genus Mycoplasma) from case of sheep pulmonary adenomatosis(S.P.A)［J］.Vet Rec,1963,75(21):550～551.

[1]	黄建文，王晓平，王念璐，徐刚毅. 山羊组织蛋白酶L基因克隆、序列分析及组织表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(7): 1-9.
[2]	崔保亮，陈利苹，张娈娈，李华芳，刘思国. 结核分枝杆菌rv0199基因在耻垢分枝杆菌中的表达及检测[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(7): 9-13.
[3]	王欣然，聂虹霞，李岩松，谭彩云，胡盼，冯小丽，任洪林，郭一平，周玉，柳增善，卢士英. 展青霉素人工抗原的制备与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(7): 14-20.
[4]	李兴玉，李金海，林毅，曹冶，罗丹丹，廖党金，魏甬，李江凌，于吉锋，张先惠. 猪细小病毒疫苗株NS1基因克隆及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(7): 21-26.
[5]	张文东，宋建领，赵焕云，刘庆亮，胡媛媛，曾伟，张富强. 云南2株基因Ⅱ型新城疫病毒F基因变异特性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(7): 54-59.
[6]	吴运谱，赵晓彤，薛树山，石霖，何利昆，张晓华，曹明慧，顾贵波，谷志大，魏澍，曹东. 1株Ⅶ型新城疫病毒融合蛋白基因的克隆与生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(7): 68-73.
[7]	李丹丹，徐义刚，王绥家，高慎阳，李一经. 肠出血性大肠埃希菌O157∶H7实时荧光定量PCR快速检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(7): 81-84.
[8]	陈国顺，李冲，俞瑞山，冯光彧，陈胜. 日粮中添加腐植酸钠对肉仔鸡成活率及生长性能的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(7): 122-125.
[9]	孙焕林，张文举，刘艳丰，唐淑珍. 甘草酸的生物学功能、提取工艺及其在单胃动物中的应用[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(7): 126-130.
[10]	安培培，李春义. 威尔姆氏瘤基因1对肾脏和性腺发育影响的研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(7): 136-141.
[11]	王轶敏，代阳，刘新峰，刘中伟，李吉霞，郭宏，丁向彬. 牛骨骼肌卫星细胞的分离鉴定和诱导分化[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(7): 142-147.
[12]	王昕，王岩，秦顺义，王宏祥，王景申. 不同剂量硒蛋白粉对大鼠血常规指标和血液生化指标的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(7): 148-152.
[13]	张谊，何自标，陈晨，鲜红，张明. TLR4在妊娠异常终止中的作用机制和研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(7): 153-158.
[14]	王海军，赵德良，李树伟，谢飞，铁鑫. 舍饲和田羊与卡拉库尔羊生长发育指标的测定[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(7): 163-168.
[15]	薛倩，王金玉，张跟喜，王亚男，唐莹，魏岳，施会强. 京海黄鸡甲状腺激素应答蛋白Spot14α基因外显子1多态性与屠体和腹脂性状的相关性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(7): 169-174.