核酸免疫制备抗猪流感病毒HA单克隆抗体

中国畜牧兽医

核酸免疫制备抗猪流感病毒HA单克隆抗体

李越¹^，2，王伟²，赵颖慧²，周长良¹^，2，臧凤霞²，冉多良¹，孟庆文²，陈洪岩²

（1.新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐 830000；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨 150001）

修回日期:2014-03-25 出版日期:2014-07-20 发布日期:2014-08-21
通讯作者: 冉多良。E-mail:xjrdl7@163.com 孟庆文。E-mail:mqw@hvri.ac.cn 陈洪岩。E-mail:chenhongyan@caas.cn
作者简介:李越（1987—），男，河北人，硕士生,研究方向：病原微生物及分子生物学。
基金资助:
黑龙江省高等学校科技创新团队项目（2010td02）；“十二五”农村领域国家科技计划课题（2011AA100305-2）；黑龙江省实验动物科技发展专项（PC13S16）；中央级公益科研院所基本科研项目（0302013015）。

Preparation of Monoclonal Antibody against Swine Influenza Virus HA by Nucleic Acid Immunization

LI Yue¹^，2, WANG Wei², ZHAO Ying-hui², ZHOU Chang-liang¹^，2, ZANG Feng-xia², RAN Duo-liang¹, MENG Qing-wen², CHEN Hong-yan²

(1. College of Veterinary Medicine, Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830000, China; 2. National Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150001, China)

Revised:2014-03-25 Online:2014-07-20 Published:2014-08-21

摘要/Abstract

摘要： 为制备H1N1猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody，McAb)，本试验利用表达猪流感病毒A/Swine/Guangdong/2004(H1N1)毒株HA蛋白的表达质粒pVAX1-HA肌注股内肌免疫BALB/c小鼠，将其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合；通过间接ELISA方法筛选和有限稀释法克隆，获得9株稳定分泌抗HA单克隆抗体的杂交瘤细胞。中和试验结果显示，单克隆抗体4D5株对H1N1流感病毒起中和作用，该单克隆抗体杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶1024。这株单克隆抗体与哈尔滨兽医研究所国家重点实验室保存的H3N2流感病毒、H5N1流感病毒均不发生交叉反应，显示出了很好的H1特异性；间接免疫荧光试验结果显示，这株单克隆抗体能与H1N1流感病毒发生特异性反应。制备的特异性抗HA单克隆抗体为建立H1N1流感病毒免疫学检测方法和单链抗体抗病毒复制研究奠定了基础。

关键词: H1N1流感病毒; 血凝素蛋白; 单克隆抗体

Abstract: For the preparation of monoclonal antibody(McAb) against HA protein of swine influenza virus, DNA plasmid bearing HA gene of A/Swine/Guangdong/2004(H1N1) was used to immunize BALB/c mice followed by generation of a McAb using the hybridoma technique. The generated nine McAbs were identified by ELISA. Functional analysis demonstrated the McAb 4D5 neutralized the virus. Furthermore, the McAb 4D5 didn’t have cross-reactivity with H3N2 or H5N1 influenza viruses, showing highly specific to H1N1. Immunofluorescence assay showed that McAb 4D5 was able to detect infection of cells with H1N1. Over all, McAb 4D5 proved specific and highly sensitive for A/Swine/Guangdong/2004(H1N1) HA and could potentially serve as immunodiagnostic tools for the rapid detection of this specific strain of influenza virus and laid the foundation for the study of single chain antibody fragment.

Key words: H1N1 influenza virus; hemagglutinin protein; monoclonal antibody

李越，王伟，赵颖慧，周长良，臧凤霞，冉多良，孟庆文，陈洪岩. 核酸免疫制备抗猪流感病毒HA单克隆抗体[J]. 中国畜牧兽医.

LI Yue, WANG Wei, ZHAO Ying-hui, ZHOU Chang-liang, ZANG Feng-xia, RAN Duo-liang, MENG Qing-wen, CHEN Hong-yan. Preparation of Monoclonal Antibody against Swine Influenza Virus HA by Nucleic Acid Immunization[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine.

[1]	王小格, 司煊瑛, 闫志伟, 王飞, 尤龙琪, 刘梗, 蔡茂, 梁珺珹, 梁玉秀, 杜永坤, 张改平. 非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(2): 781-791.
[2]	韩凤烨, 刘莹, 潘晨帆, 张乾义, 陈小云, 朱真, 印春生, 温永俊, 王凤雪, 杜吉革. 产气荚膜梭菌Alpha毒素突变体的表达及单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(1): 442-450.
[3]	程晶, 陈沛霖, 郭禹, 崔锦蔷, 江波, 周林宜, 刘文晓, 李焕荣, 李永清. 牛早幼粒细胞白血病蛋白的原核表达及单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(9): 4014-4024.
[4]	崔锦蔷, 程晶, 江波, 周林宜, 刘文晓, 李永清, 宋勤叶. 鸡γ-干扰素的原核表达及其单克隆抗体制备与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(7): 3008-3019.
[5]	付明智, 李新新, 刘雪威, 李焕荣. 猪源分泌性白细胞蛋白酶抑制因子的原核表达及单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(6): 2556-2565.
[6]	杨大为, 刘书怡, 蔺雅婷, 陈虎, 张洪亮, 李桂梅. 猪伪狂犬病病毒gB蛋白单克隆抗体的制备及竞争ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(12): 5439-5448.
[7]	曹梦瑶, 王晶, 周林宜, 程晶, 李永清, 许健, 江波, 胡格. 抗鸡早幼粒细胞白血病蛋白单克隆抗体的制备及其在荧光检测中的应用[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(10): 4500-4509.
[8]	马天天, 张亚楠, 冯亚文, 岳怀宁, 王亚文, 苏恺, 袁晨, 逯纪成, 孙泰然, 薛文阁, 宋勤叶. 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(7): 2832-2842.
[9]	侯浩宇, 郑南南, 吴宏举, 陈寅龙, 李潮, 张昂克, 姬鹏超, 万博, 杜永坤, 张改平. 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备和鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1241-1249.
[10]	陈桂娥, 容芳, 冯夏宁, 孙荣航, 马绍钊, 郝文茜, 叶子安, 刘郁夫, 李作生, 陈瑞爱. 非洲猪瘟病毒p72蛋白原核表达及单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(11): 4646-4654.
[11]	王乐铭, 王瑜瑞, 曾子轩, 饶国顺, 吴正姣, 靳纬坤, 王冬英. 抗大片形吸虫Cat L1单克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 677-686.
[12]	赵少若, 黄甜, 郝丽影, 吴洪超, 汪志艳, 崔宁宁, 王亚玲, 邓均华, 田克恭. 犬轮状病毒单克隆抗体制备及胶体金试纸条检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4429-4437.
[13]	莫红芳, 揭凯, 陈鑫, 文威, 刘文强, 陈焕春, 钱平, 李祥敏. 猪塞尼卡谷病毒单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 307-317.
[14]	胡换仪, 汪建中, 刘昌锦, 林敏, 刘小兰, 魏黄思梧, 邓舜洲. 绿色荧光蛋白的真核表达及其单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 328-337.
[15]	曾建宇, 董振远, 贾文凤, 张国中, 薛佳. 新城疫病毒M蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(9): 3423-3431.