藏绵羊乳腺乳铁蛋白的克隆及序列分析

›› 2013, Vol. 40 ›› Issue (9): 86-90.

藏绵羊乳腺乳铁蛋白的克隆及序列分析

李建波^1,2, 江明锋^1,2, 王永¹

1. 青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室, 四川成都 610041;
2. 西南民族大学生命科学与技术学院, 四川成都 610041

收稿日期:2013-01-18 出版日期:2013-09-20 发布日期:2013-09-18
通讯作者: 王永 E-mail:wangyong010101@swun.cn
作者简介:李建波(1989-),男,四川人,硕士生,研究方向:动物遗传育种与繁殖。
基金资助:
国家科技支撑计划(2012BAD13B06);四川省科技创新产业链示范工程重大项目(2011NZ0003);中央高校基本科研业务费专项资金项目(11ZYXS24,12ZYXS);四川省2011年度学术技术带头人和留学归国人员项目。

Cloning and Sequence Analysis of Lactoferrin Gene in Tibetan Sheep

LI Jian-bo^1,2, JIANG Ming-feng^1,2, WANG Yong¹

1. Key Laboratory of Sichuan Province for Qinghai-Tibetan Plateau Animal Genetic Resource Reservation and Exploitation, Chengdu 610041, China;
2. College of Life Science and Technology, Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041, China

Received:2013-01-18 Online:2013-09-20 Published:2013-09-18

摘要/Abstract

摘要： 本研究以四川若尔盖县藏系绵羊为材料,利用RT-PCR方法扩增并克隆了藏绵羊乳铁蛋白(lactoferrin,LF)序列,运用生物信息学软件对其核苷酸序列和编码蛋白质的结构进行预测和分析。结果表明,克隆的LF基因全长2127 bp,共编码708个氨基酸,N端有19个氨基酸组成的信号肽,该蛋白质等电点为8.4,预测分子质量为77.2 ku;半定量RT-PCR分析结果表明,LF在乳腺、气管、淋巴、肝脏、泪腺和脾脏中都有表达,在肺脏中不表达。本试验克隆了藏绵羊LF cDNA全序列,并对LF和乳铁蛋白肽(lfcin,Lfc)核苷酸和蛋白质进行了分析,为进一步研究其生物学活性奠定基础。

关键词: 藏绵羊; 乳铁蛋白基因; 乳铁蛋白肽; 克隆; 序列分析

Abstract: RT-PCR method was used to clone the full length of lactoferrin (LF) cDNA sequence in Tibetan sheep at Ruoergai county of Sichuan province. Nucleotide sequence and structure of LF amino acid sequence were deduced by bioinformatics software. The results showed that LF gene was 2127 bp in length and encoded 708 amino acids, including a signal peptide of 19 amino acids at its N terminal. Isoelectric point (pI) of this protein was 8.4, and the molecule mass of the predicted protein was 77.2 ku. Semi-quantitative RT-PCR results indicated that LF gene was expressed in mammary, trachea, lymph, liver, lachrymal and spleen, but not in lung. In conclusion,LF gene in Tibetan sheep had been successfully cloned and the nucleotide and amino acid sequence of LF and Lfc were analysed in this study, it laid a foundation for further research.

Key words: Tibetan sheep; LF gene; Lfc; clone; sequence analysis

中图分类号:

Q785

李建波, 江明锋, 王永. 藏绵羊乳腺乳铁蛋白的克隆及序列分析[J]. , 2013, 40(9): 86-90.

LI Jian-bo, JIANG Ming-feng, WANG Yong. Cloning and Sequence Analysis of Lactoferrin Gene in Tibetan Sheep[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2013, 40(9): 86-90.

参考文献

1 齐莉莉, 许梓荣. 乳铁蛋白及其生物学功能[J]. 饲料研究,2002,5(10): 21~23.
2 何俊,张春红,黄毓茂. 猪乳铁蛋白N叶(PLF-N)在毕赤酵母中的表达及抑菌活性鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2011,39 (9):61~64.
3 徐逸男,汪以真. 乳铁蛋白的研究进展及应用前景[J]. 饲料工业, 2006(27):7~10.
4 高思,徐亚欧,毛亮.藏绵羊脂蛋白脂酶基因克隆及序列分析[J].安徽农业科学,2011(12):7291~7294.
5 程金波,王加启,卜登攀. 乳铁蛋白的分子特性及其基因表达调控研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2007,34 (5):5~8.
6 蔡屾,叶江,张惠展. 人乳铁蛋白肽的分子改良及在大肠杆菌中的表达研究[J]. 化学与生物工程, 2011(10):28~31.
7 蔡佩玲,王晓强,张义正. 人乳铁蛋白(hLF) cDNA的克隆及序列分析[J]. 四川大学学报, 2005(42):1229~1232.
8 Atsushi I, Hiromichi I, Takashi T, et al. Liposomalization of lactoferrin enhanced it's anti-inflammatory effects via oral administration[J]. Biological and Pharmaceutical Bulletin, 2005, 28(9):1717~1721.
9 Berlutti F, Pantanella F, Natalizi T, et al. Antiviral properties of lactoferrin-A natural immunity molecule[J]. Molecules (Basel, Switzerland), 2011 (8): 6992~7018.
10 Conneely O M. Antiinflammatory Activities of Lactoferrin[J]. Journal of the American College of Nutrition,2001,20(5):389S~395S.
11 González-Chávez S A, Arévalo-Gallegos S, Rascón-Cruz Q, et al. Lactoferrin: Structure, function and applications[J]. International Journal of Antimicrobial Agents, 2009, 33(4): 301.e1~301.e8.
12 García-Montoya I, González-Chávez S A, Salazar-Martínez J, et al. Expression and characterization of recombinant bovine lactoferrin in E.coli[J]. Bio Metals, 2013, 26(1): 113~122.
13 van der Strate B W, Beljaars L, Molema G, et al. Antiviral activities of lactoferrin[J]. Antiviral Research, 2001, 225(3):225~239.
14 Varadhachary A, Wolf J S, Petrak K, et al. Oral lactoferrin inhibits growth of established tumors and potentiates conventional chemotherapy[J]. Int J Cancer, 2004, 111(3):398~403.
15 Wayne B, Mitsunori T, Koji Y, et al. Identification of the bactericidal domain of lactoferrin[J]. Biochimicaet Biophysica Acta, 1992, 1121(1~2): 130~136.
16 Wang Y Z, Shan T Z, Xu Z R, et al. Effects of the lactoferrin (LF) on the growth performance, intestinal microflora and morphology of weanling pigs [J]. Animal Feed Science and Technology, 2007, 135(3~4):263~272.
17 Zhao Y D, Zhang Y Z. Molecular cloning and expression of yak (Bos grunniens) lactoferrin cDNA in Pichia pastoris[J]. Biotechnology Letter, 2006, 28(16):1285~1292.

[1]	李天秀, 李昕鹏, 董新星, 兰国湘, 严达伟, 朱家位. 丽江猪HMOX2基因扩增、序列分析及组织表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(5): 2219-2231.
[2]	刘敏, 程淮, 郑珍珍, 张梦思, 张贺伟, 任静强. 犬副流感病毒N蛋白的真核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(5): 2287-2294.
[3]	张莹, 陈广振, 刘梅, 李红霞, 俞燕, 贾雪波, 李雯倩, 范建华, 马志禹. 半番鸭NMB基因克隆、生物信息学和组织表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(4): 1705-1715.
[4]	司维, 谭茜宇, 徐玲芸, 罗廷荣, 李晓宁, 顾金燕. H3N2亚型猪流感病毒HA1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(4): 1739-1749.
[5]	洪嘉俊, 肖金华, 张政, 杨雨婷, 方春, 韩旭. sod基因缺失对单增李斯特菌10403S抗氧化应激作用的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(4): 1776-1783.
[6]	苗书魁, 米晓云, 魏婕, 魏玉荣, 海力且木·买买提依明. G8型牛轮状病毒VP7基因克隆及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(4): 1784-1795.
[7]	黄念旎, 黄子珂, 李聪聪, 刘晗, 马诗语, 宋果, 蒋亮, 彭为波, 杨联熙, 黄生强. 九疑山兔FGF10基因克隆、生物信息学及组织表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(3): 1001-1010.
[8]	艾小楠, 程俐芬, 白璞, 陈正灏, 薛丽娜, 周胜花. 灵丘青背山羊ACSL1基因克隆、生物信息学分析及其在脂肪细胞分化过程中的表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(2): 499-511.
[9]	王晴, 马瑜锴, 韩若冰, 邢海华, 孙子惠, 李和平. 梅花鹿CSRP3基因克隆、生物信息学分析及其在肌肉组织中的表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(2): 740-748.
[10]	王小格, 司煊瑛, 闫志伟, 王飞, 尤龙琪, 刘梗, 蔡茂, 梁珺珹, 梁玉秀, 杜永坤, 张改平. 非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(2): 781-791.
[11]	谢蓓伊庭, 王悦, 孟春花, 钱勇, 张俊, 张建丽, 王慧利, 曹少先, 李隐侠. 湖羊PSMB9基因克隆、序列分析及对成肌细胞增殖的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(1): 1-12.
[12]	韩凤烨, 刘莹, 潘晨帆, 张乾义, 陈小云, 朱真, 印春生, 温永俊, 王凤雪, 杜吉革. 产气荚膜梭菌Alpha毒素突变体的表达及单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(1): 442-450.
[13]	郭晨云, 宋金星, 王梦翔, 孙俊如, 闫若潜, 谢彩华, 吴亚楠, 张改平. 非洲猪瘟病毒B602L蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(9): 3980-3989.
[14]	程晶, 陈沛霖, 郭禹, 崔锦蔷, 江波, 周林宜, 刘文晓, 李焕荣, 李永清. 牛早幼粒细胞白血病蛋白的原核表达及单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(9): 4014-4024.
[15]	崔艳艳, 王冠, 郝俊芳, 李志强, 余复昌, 史柯, 席丽, 齐萌. 嗜吞噬细胞无浆体MSP4蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(9): 4036-4042.