猪瘟病毒E2蛋白A/D区单抗的制备及其抗原表位的初步研究

›› 2009, Vol. 36 ›› Issue (9): 50-54.

猪瘟病毒E2蛋白A/D区单抗的制备及其抗原表位的初步研究

张春玲¹，宗先伟²，杨文超¹，张敬梅¹，彭明义¹，程宝艳³，余为一^1

（1.安徽农业大学动物科技学院，合肥 230036； 2.山东六和集团有限公司，德州 253000；3.安徽省农业科学院畜牧兽医研究所，合肥 230031）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-09-20 发布日期:2009-09-20
通讯作者: 余为一

Preparation and Identification of Monoclonal Antibodies against the Truncated E2 Protein of Classical Swine Fever Virus

ZHANG Chun-ling¹, ZONG Xian-wei², YANG Wen-chao¹, ZHANG Jing-mei¹, PENG Ming-yi¹, CHENG Bao-yan³, YU Wei-yi¹

（1.College of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China; 2.Shandong Liuhe Poultry Company， Dezhou 253000, China; 3.Institute of Animal and Veterinary Science, Anhui Academy of Agricultural Science, Hefei 230031, China）

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-09-20 Published:2009-09-20
Contact: YU Wei-yi

摘要/Abstract

摘要： 应用分子克隆技术将猪瘟病毒E2蛋白部分基因插入到载体pGEX-4T-1中构建重组质粒pGEX-4T-E（A），在大肠杆菌Rosetta中表达融合蛋白GST-E（A），以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合，经克隆化和间接ELISA筛选，获得了C3、A1两株稳定分泌抗猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，ELISA结果显示，其腹水效价为1∶128000和1∶256000。Western blotting结果证实，单克隆抗体C3和A1能与猪瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）发生特异性的反应，表明该单抗是针对猪瘟病毒E2蛋白的保守线性表位。

关键词: 猪瘟病毒; E2蛋白; 单克隆抗体; 鉴定

Abstract: A truncated gene encoding the major antigenic domains of E2 protein of classical swine fever virus (CSFV) was amplified and cloned into pGEX-4T-1 expression vector to obtain recombinant pGEX-4T-E（A）.The recombinant GST-E（A）protein expressed in E.coli Rosetta. BALB/c mice was immunized with purified GST-E（A）protein as antigen and mouse splenic cells were fused with SP2/0 cells. Hybridoma cells were screened by ELISA and subcloned. Two hybridoma cells C3 and A1 secreting anti-CSFV monoclonal antibodies were obtained. The ELISA showed the antibody titres were 1∶128000 and 1∶256000. Western blotting indicated that C3 and A1 reacted with CSFV specially. These results demonstrated that the McAbs were specific reagent for CSFV, and recognized a linear conserved epitope on the E2 protein.

Key words: classical swine fever virus; E2 protein; monoclonal antibody; identification

中图分类号:

S859.79⁺7

张春玲;宗先伟;杨文超;张敬梅;彭明义;程宝艳;余为一. 猪瘟病毒E2蛋白A/D区单抗的制备及其抗原表位的初步研究[J]. , 2009, 36(9): 50-54.

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