猪乙型脑炎病毒囊膜E蛋白间接ELISA诊断方法的建立与初步应用

›› 2010, Vol. 37 ›› Issue (7): 170-175.

猪乙型脑炎病毒囊膜E蛋白间接ELISA诊断方法的建立与初步应用

张宁1，金洪涛2，丁壮1，张瑞岩2，刘雯1，李勇1，薛会亮2，李丹2，夏志平2

（1.吉林大学畜牧兽医学院，长春 130062；2.中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所，长春 130062）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-07-20 发布日期:2010-07-20
通讯作者: 夏志平

Development of an Indirect ELISA for the Detection of Japanese Encephalitis Virus Using Envelope E Protein

〗ZHANG Ning1, JIN Hong-tao2, DING Zhuang1, ZHANG Rui-yan2, LIU Wen1,LI Yong1,XUE Hui-liang2, LI Dan2, XIA Zhi-ping2

(1.College of Animal Science and Veterinary Medicine, Jilin University, Changchun 130062, China;2.Military Veterinary Institute, Academy of Military Medical Sciences of PLA, Changchun 130062, China)

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-07-20 Published:2010-07-20
Contact: XIA Zhi-ping

摘要/Abstract

摘要： 本研究利用纯化的原核表达乙型脑炎囊膜E蛋白作为包被抗原，建立了乙型脑炎间接ELISA诊断方法。对检测的各种条件进行了优化，优化反应条件后确定的抗原最适包被浓度为2 μg/mL，抗原最佳包被条件为37 ℃包被2 h，血清的最适稀释度为1∶160，酶标抗体最适稀释度为1∶5000，最佳封闭条件为1% BSA，阴阳性临界值判定标准为D492 nm=0.254。该方法不与猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒阳性血清反应，其D492 nm<0.254，说明该方法具有良好的特异性。采用该方法对150份疑似乙型脑炎血清样品进行检测，结果显示,与某猪乙型脑炎试剂盒相比符合率为90.77%，表明建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性，因此，本研究成功建立了能特异性检测抗乙型脑炎血清抗体的ELISA检测方法。

关键词: 乙型脑炎病毒; E蛋白; 间接ELISA

Abstract: An indirect ELISA was established for the rapid detection of specific Japanese encephalitis virus (JEV) antibodies in swine using a recombinant E protein as an antigen. The recombinant E protein was expressed from recombinant plasmid pET28a-E in Escherichia coli. The various factors affected the experiments were optimized. This assay was optimized using 2 μg/mL E protein as coat antigen, the optimal coating condition of JEV for ELISA was incubated at 37 ℃ for 2 hours, 1∶160 dilution of testing serum and 1∶5000 dilution of HRP-labeled goat anti-swine IgG, the best blocking buffer was BAS with 1% consent ration. The critical value of positive and negative of ELISA was D492 nm=0.254, this method is not with the serums of CSFV, PRRSV, PCV2, PRV reaction, D492 nm<0.254, explain its specificity. Test against 150 serum samples from Jilin province by this assay detected 43.33% positive, which showed 90.77% agreement with ELISA kit test. Therefore, this study indicated that an indirect ELISA method for specifically detection JEV in serum was successfully established.

Key words: Japanese encephalitis virus; recombinant E protein; indirect ELISA

中图分类号:

S852.65

张宁;金洪涛;丁壮;张瑞岩;刘雯;李勇;薛会亮;李丹;夏志平. 猪乙型脑炎病毒囊膜E蛋白间接ELISA诊断方法的建立与初步应用[J]. , 2010, 37(7): 170-175.

〗ZHANG Ning;JIN Hong-tao;DING Zhuang;ZHANG Rui-yan;LIU Wen;LI Yong;XUE Hui-liang;LI Dan;XIA Zhi-ping. Development of an Indirect ELISA for the Detection of Japanese Encephalitis Virus Using Envelope E Protein[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2010, 37(7): 170-175.

[1]	潘向英, 曾智勇, 梁海英, 汤德元, 王彬, 叶泥, 田红利, 边孟婷, 柳佳佳, 黄书. 猪轮状病毒VP6蛋白截短表达及间接ELISA抗体检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(3): 1231-1240.
[2]	靳双媛, 杜家伟, 王雪妍, 郭雪莲, 许立华. 牛冠状病毒S和HE蛋白研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(7): 3118-3127.
[3]	高乐, 司朵朵, 郭磊, 陈灿, 王玮, 王健霖, 王玲玲, 李继东. 滑液囊支原体GA组件蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(6): 2621-2632.
[4]	任建乐, 林铱婷, 姬康, 谭姗姗, 陈新新, 晋怡, 王颖, 牛胜, 梁立滨, 李俊平, 赵宇军, 田文霞. A型塞内卡病毒VP2蛋白多克隆抗体的制备及间接ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(2): 678-688.
[5]	张宜宸, 孙明军, 邓昌顺, 丁家波, 徐宝梁, 陈磊, 全春兰, 赵康, 范学政, 秦彤. 基于重组E2蛋白的牛病毒性腹泻病毒间接ELISA抗体检测方法的建立与评价[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(12): 5459-5469.
[6]	徐浩钧, 刘颖, 梅晨, 徐彤, 利凯, 王宏俊. 基于外膜蛋白的鼻气管鸟杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(10): 4420-4428.
[7]	王程, 夏应菊, 王海东, 刘业兵. 非洲猪瘟病毒P54蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(10): 4440-4449.
[8]	张芳源, 蔺雅婷, 杨大为, 陈虎, 李桂梅, 单虎. 非洲猪瘟病毒P30蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2012-2022.
[9]	牛小杰, 徐明国, 肖莉, 刘文豪, 陈创夫, 王勇. 鸡白痢沙门氏菌IPAJ蛋白的表达纯化、多克隆抗体制备及ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1218-1228.
[10]	张妍, 战力源, 姜福洁, 马红霞, 孔令聪. 牛支原体重组蛋白P48原核表达、多克隆抗体制备及间接ELISA抗体检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(11): 4621-4631.
[11]	张凯, 张春平, 戈胜强, 孙春喜, 程杰, 伏春雨, 王刚, 牛星, 彭军. 非洲猪瘟病毒p22蛋白表达、多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 270-279.
[12]	韩瑞, 杨行, 张文波, 陈佳玲, 周晓丽. 猪链球菌自溶素的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(9): 3508-3519.
[13]	张文燕, 王亚文, 袁晨, 冯亚文, 滕召剑, 商佳亮, 逯纪成, 宋勤叶. 基于非洲猪瘟病毒截短p72蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(7): 2688-2697.
[14]	田广原, 王宇琛, 周雅坪, 郭婷, 赵红梅, 赵逢淼, 孙雅婕, 卞宇晨, 于佳梁, 周雨霞. 绵羊肺炎支原体P60_58aa-928aa蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1960-1969.
[15]	陈静, 吴燕, 李梅, 岳筠, 朱二鹏, 文明, 张双翔, 程振涛. 丝状支原体山羊亚种LPPA蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 318-327.