猪乙型脑炎病毒囊膜E蛋白间接ELISA诊断方法的建立与初步应用

›› 2010, Vol. 37 ›› Issue (7): 170-175.

猪乙型脑炎病毒囊膜E蛋白间接ELISA诊断方法的建立与初步应用

张宁1，金洪涛2，丁壮1，张瑞岩2，刘雯1，李勇1，薛会亮2，李丹2，夏志平2

（1.吉林大学畜牧兽医学院，长春 130062；2.中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所，长春 130062）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-07-20 发布日期:2010-07-20
通讯作者: 夏志平

Development of an Indirect ELISA for the Detection of Japanese Encephalitis Virus Using Envelope E Protein

〗ZHANG Ning1, JIN Hong-tao2, DING Zhuang1, ZHANG Rui-yan2, LIU Wen1,LI Yong1,XUE Hui-liang2, LI Dan2, XIA Zhi-ping2

(1.College of Animal Science and Veterinary Medicine, Jilin University, Changchun 130062, China;2.Military Veterinary Institute, Academy of Military Medical Sciences of PLA, Changchun 130062, China)

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-07-20 Published:2010-07-20
Contact: XIA Zhi-ping

摘要/Abstract

摘要： 本研究利用纯化的原核表达乙型脑炎囊膜E蛋白作为包被抗原，建立了乙型脑炎间接ELISA诊断方法。对检测的各种条件进行了优化，优化反应条件后确定的抗原最适包被浓度为2 μg/mL，抗原最佳包被条件为37 ℃包被2 h，血清的最适稀释度为1∶160，酶标抗体最适稀释度为1∶5000，最佳封闭条件为1% BSA，阴阳性临界值判定标准为D492 nm=0.254。该方法不与猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒阳性血清反应，其D492 nm<0.254，说明该方法具有良好的特异性。采用该方法对150份疑似乙型脑炎血清样品进行检测，结果显示,与某猪乙型脑炎试剂盒相比符合率为90.77%，表明建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性，因此，本研究成功建立了能特异性检测抗乙型脑炎血清抗体的ELISA检测方法。

关键词: 乙型脑炎病毒; E蛋白; 间接ELISA

Abstract: An indirect ELISA was established for the rapid detection of specific Japanese encephalitis virus (JEV) antibodies in swine using a recombinant E protein as an antigen. The recombinant E protein was expressed from recombinant plasmid pET28a-E in Escherichia coli. The various factors affected the experiments were optimized. This assay was optimized using 2 μg/mL E protein as coat antigen, the optimal coating condition of JEV for ELISA was incubated at 37 ℃ for 2 hours, 1∶160 dilution of testing serum and 1∶5000 dilution of HRP-labeled goat anti-swine IgG, the best blocking buffer was BAS with 1% consent ration. The critical value of positive and negative of ELISA was D492 nm=0.254, this method is not with the serums of CSFV, PRRSV, PCV2, PRV reaction, D492 nm<0.254, explain its specificity. Test against 150 serum samples from Jilin province by this assay detected 43.33% positive, which showed 90.77% agreement with ELISA kit test. Therefore, this study indicated that an indirect ELISA method for specifically detection JEV in serum was successfully established.

Key words: Japanese encephalitis virus; recombinant E protein; indirect ELISA

中图分类号:

S852.65

张宁;金洪涛;丁壮;张瑞岩;刘雯;李勇;薛会亮;李丹;夏志平. 猪乙型脑炎病毒囊膜E蛋白间接ELISA诊断方法的建立与初步应用[J]. , 2010, 37(7): 170-175.

〗ZHANG Ning;JIN Hong-tao;DING Zhuang;ZHANG Rui-yan;LIU Wen;LI Yong;XUE Hui-liang;LI Dan;XIA Zhi-ping. Development of an Indirect ELISA for the Detection of Japanese Encephalitis Virus Using Envelope E Protein[J]. , 2010, 37(7): 170-175.

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