兔抗犬细小病毒2a型多克隆抗体交叉保护研究

中国畜牧兽医 ›› 2014, Vol. 41 ›› Issue (9): 47-51.

兔抗犬细小病毒2a型多克隆抗体交叉保护研究

李思琪^1,2, 彭广能¹

1. 四川农业大学动物医学院, 动物疫病与人类健康四川省重点实验室, 四川雅安 625014;
2. 重庆三峡职业学院动物科技系, 重庆 404155

收稿日期:2014-02-24 出版日期:2014-09-20 发布日期:2014-09-24
通讯作者: 彭广能
作者简介:李思琪（1987- ），女，四川人，硕士生，研究方向：小动物疾病学。
基金资助:
四川省教育厅重点项目（09ZA082）；教育部“长江学者和创新团队发展规划”创新团队项目（IRT0848）；四川农业大学双支计划（00270706）。

Study on Preparation of Rabbit Anti-canine Parvovirus Type 2a Polyclonal Antibody

LI Si-qi^1,2, PENG Guang-neng¹

1. Animal Disease and Human Health Key Laboratory of Sichuan Province, College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University, Ya'an 625014, China;
2. Department of Animal Science and Technology, Chongqing Three Gorges Vocational College, Chongqing 404155, China

Received:2014-02-24 Online:2014-09-20 Published:2014-09-24

摘要/Abstract

摘要： 为探究犬细小病毒（canine parvovirus，CPV）血清型只有一种的条件下，常用疫苗CPV-2型和CPV-2a病毒免疫血清抗体对国内流行CPV-2a病毒的中和率，试验将藏獒源CPV-2a毒株（10⁵ TCID₅₀/100 μL）和CPV-2（10^4.5TCID₅₀/100 μL）疫苗接于F81细胞增殖，PEG6000法浓缩制成免疫原，各免疫新西兰长白兔3只，间隔2周1次，共免疫4次。收集血清纯化制备多克隆抗体，通过血凝抑制试验（HI）和血清中和试验（SN）分别用2种抗体中和CPV-2、CPV-2a病毒，对两者保护率进行初步评价，并对本地感染CPV-2a的4只犬，每组2只进行治疗，每日跟踪白细胞消长规律。结果显示，CPV-2a多抗中和国内流行病毒CPV-2a的HI抗体、中和抗体水平都极显著高于CPV-2多抗（P<0.01），而中和CPV-2病毒的HI抗体、中和抗体水平两者差异不显著（P>0.05），CPV-2a多抗组治疗能较快恢复正常值，2组白细胞数有显著差异（P＜0.05）。结果表明，CPV-2a多抗与常用CPV-2型疫苗免疫抗体相比能高滴度的中和CPV-2a，更适用于中国犬细小病毒的防制，对研发新型生物制品有一定意义。

关键词: 多克隆抗体; CPV-2a; CPV-2; 交叉保护

Abstract: To study the antigenic relationship among the original canine parvovirus type (CPV) 2 (CPV-2) and the variants CPV-2a,the strain of 10⁵TCID₅₀/100 μL from infected Tibetan mastiff which turns out the gene was CPV-2a and CPV-2 strain from vaccine was picked out to be generally amplified in the F81 cells. After analyzing the strains with HA and protein concentration with PEG6000, the viral suspension was emulsified with the adjuvant to immune two groups of each three New Zealand rabbits in every two weeks and four times. Serum antibody titer was detected in each preimmune. After four times immunity, serum of each group was collected to make separated gene polyclonal antibody. Then the antibody titer was tested by SN and HI with CPV-2 and CPV-2a virus and protection data was analyzed by SPSS 17.0. And two polyclonal antibodies were separated treated 2 dogs which was inoculation CPV-2a and infected. Blood samples were collected every day during treatment,then WBC was analyzed by SPSS 17.0. The results showed that the CPV-2a polyclonal antibody was more significant to CPV-2a virus than the other one by HI and SN (P<0.01).But counteract CPV-2 strain was not significant (P>0.05). CPV-2a polyclonal antibody was given more protection against CPV-2a and WBC was faster recovery to normal level than the other in experimental treatment (P<0.05).It showed that CPV-2a polyclonal antibody have higher homologous protection than the antibody induced by CPV-2 vaccine in Chinese canine parvovirus control.

Key words: polyclonal antibody; CPV-2a; CPV-2; cross protection

中图分类号:

S852.4⁺3

李思琪, 彭广能. 兔抗犬细小病毒2a型多克隆抗体交叉保护研究[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(9): 47-51.

LI Si-qi, PENG Guang-neng. Study on Preparation of Rabbit Anti-canine Parvovirus Type 2a Polyclonal Antibody[J]. , 2014, 41(9): 47-51.

参考文献

1 白挨泉,陈云,郑军,等. 犬细小病毒免疫血清的研制与初步应用[J]. 畜牧与兽医,2002,34(7):23～24.

2 刘小松,赵世华,常建华,等. 山羊抗犬细小病毒高免血清临床效力实验研究[J]. 中国动物保健,2008,111(5):31～32.

3 刘震华,殷震. 动物病毒学[M]. 第2版.北京:科学出版社,1997.

4 李六金,押宗保,姜焕宏,等. 驴抗犬细小病毒IgG的研制[J]. 中国动物检疫,2002,19(8):23～24.

5 李六金,屈红丽,姜焕宏,等. 抗犬细小病毒免疫球蛋白临床应用研究[J]. 中国兽药杂志,2003,37(3):46～47.

6 李作生,邱薇,范泉水. 犬细小病毒VP2基因的比较及分型研究[J]. 动物医学进展,2005,26(5):69～72.

7 常建华,赵世华,刘小松,等.山羊抗犬细小病毒高免血清临床效力实验研究[J].中国动物保健,2008,111(5):31～32.

8 魏春华,刘建奎,戴爱玲,等. 猪细小病毒的分离与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2012, 39(10): 211～214.

9 Carmichael L E, Joubert J C, Pollock R V H, et al. Hemagglutination by canine parvovirus: Serologic studies and diagnostic applications[J]. American Journal of Veterinary Research, 1980, 41(5):784～791.

10 Cavalli A, Normanno G, Pratelli A, et al. Immunization of pups with maternally derived antibodies to canine parvovirus (CPV) using a modified-live variant (CPV-2b)[J]. J Vet Med, 2000, 47(4):273～276.

11 Cavalli A, Desario C, Martella V, et al. Evaluation of the antigenic relationships among canine parvovirus type 2 variants[J]. Clinical and Vaccine Immunology, 2008, 15(3): 534～539.

12 Csiza C K, Gillesple J H, Scot F W, et al. Feline viruses: Serum-neutralization test for feline panleukopenia [J]. Cornell Vet, 1970, 60(2):183～191.

13 Ikeda Y, Mochizuki M, Naito R, et al. Predominace of canine parvovirus (CPV) in unvaccinated cat populations and emergence of new antigentic types of CPVs in cat[J]. Virology, 2000, 278(1):13～19.

14 Kazuya N, Masato N, Takayuki M, et al. Monoclonal antibodies that distinguish antigenic variants of canine parvovirus[J].Clinical And Diagnostic Laboratory Immunology, 2003, 10(6): 1085～1089.

15 Masato N, Kazuya N, Takayuki M, et al. Monoclonal antibodies that distinguish antigenic variants of canine parvovirus[J].Clinical And Diagnostic Laboratory Immunology, 2003, 10(6): 1085～1089.

16 Scot F W, Csiza C K, Gillesple J H, et al. Feline viruses: Serum-neutralization test for feline panleukopenia[J]. Cornell Vet, 1970, 60(2):183～191.

[1]	焦琳琳, 成玉婷, 吴庆国, 吴双, 吴植, 朱善元, 钱莺娟. 鸭坦布苏病毒Capsid蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2395-2402.
[2]	欧云文, 潘琴, 汪洋, 代军飞, 任绍科, 张洋, 张杰. 猪细小病毒6型ORF2基因的截短表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2487-2495.
[3]	王雪平, 张孝俊, 李晓月, 王国栋, 张福良, 宋玉伟, 张明亮, 马磊. 高致病性禽腺病毒血清4型Hexon蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2053-2060.
[4]	胡乐玉, 胡欣瑶, 李颖, 赵盛淼, 沈凤臻, 王长法, 李亮亮, 王彤彤, 任慧英. 德州驴HO-1基因生物信息学分析及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1499-1510.
[5]	王文婕, 茹鹏辉, 郁川, 杜付熙, 陈松彪, 尚珂, 张春杰, 程相朝. 猫细小病毒洛阳分离株VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1511-1521.
[6]	牛小杰, 徐明国, 肖莉, 刘文豪, 陈创夫, 王勇. 鸡白痢沙门氏菌IPAJ蛋白的表达纯化、多克隆抗体制备及ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1218-1228.
[7]	张梦杨, 何健, 刘阳坤, 姚伦广. 非洲猪瘟病毒p37蛋白生物信息学分析及其多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 300-309.
[8]	朱丽霖, 王后坤, 陈雪阳, 刘晶, 梁雄燕, 方春, 杨玉莹. 鸡IFIT5对J亚群禽白血病病毒在DF-1细胞内复制的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 310-316.
[9]	肖洋洋, 马忠臣, 李芮芮, 陈创夫, 郑炜, 王勇, 王鹏雁. 布鲁氏菌分泌蛋白BspI生物信息学分析及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(8): 3112-3121.
[10]	王炜, 韩慧慧, 丁乃峥, 何成强. 牛病毒性腹泻病毒E0蛋白的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(8): 3131-3139.
[11]	刘铭, 张永宁. 猪丁型冠状病毒N蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(7): 2698-2707.
[12]	许春梅, 邵明珠, 王心悦, 林佳迪, 郭建雄, 张祥胤, 童德文, 梁瑞英, 赵晓民. 非洲猪瘟病毒D250R蛋白生物信息学分析及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(12): 4745-4755.
[13]	刘超, 王后坤, 朱丽霖, 刘晶, 梁雄燕, 方春, 杨玉莹. 鸡RNF165蛋白多克隆抗体制备及其生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4159-4167.
[14]	张天爱, 李婷婷, 陶晓莉, 李藤菲, 林家锋, 胡思漫, 刘文秀, 佟伟, 李永刚. 猪流行性腹泻病毒S蛋白原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4383-4391.
[15]	杨景, 张新宇, 梁志鹏, 程晴, 王聪颖, 池仕红, 袁生, 郭锦玥, 黄淑坚, 温峰. H9N2亚型禽流感病毒NP蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(10): 3963-3971.