鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ基因原核表达和单克隆抗体的制备及鉴定

中国畜牧兽医 ›› 2014, Vol. 41 ›› Issue (9): 20-24.

鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ基因原核表达和单克隆抗体的制备及鉴定

周长良¹, 张雅春¹, 王伟¹, 李越¹, 赵颖慧¹, 臧凤霞¹, 冉多良², 孟庆文¹, 陈洪岩¹

1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所, 兽医生物技术国家重点实验室, 黑龙江哈尔滨 150001;
2. 新疆农业大学动物医学学院, 新疆乌鲁木齐 830000

收稿日期:2014-04-10 出版日期:2014-09-20 发布日期:2014-09-24
通讯作者: 孟庆文, 陈洪岩 E-mail:mqw@hvri.ac.cn;chenhongyan@caas.cn
作者简介:周长良（1988- ），男，江苏人，硕士生，研究方向：病原微生物及分子生物学。
基金资助:
中央级公益性科研院所基本科研业务费（1610302014022）；地方科技攻关计划课题（PC13S16）；“十二五”农村领域国家科技计划课题（2011AA100305-2）。

Prokaryotic Expression of Duck Retinoic Acid inducible-gene Ⅰ and Preparation and Identification of Monoclonal Antibody against the Protein

ZHOU Chang-liang¹, ZHANG Ya-chun¹, WANG Wei¹, LI Yue¹, ZHAO Ying-hui¹, ZANG Feng-xia¹, RAN Duo-liang², MENG Qing-wen¹, CHEN Hong-yan¹

1. National Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150001, China;
2. College of Veterinary Medicine, Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830000, China

Received:2014-04-10 Online:2014-09-20 Published:2014-09-24

摘要/Abstract

摘要： 本试验旨在制备针对鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ（RIG-Ⅰ）全长蛋白的单克隆抗体。从鸭脾脏cDNA中扩增鸭RIG-Ⅰ基因N端长度均为900 bp的a（1—900 bp）和b（751—1650 bp）2段基因片段，将其克隆入原核表达载体pET-30a中；重组质粒转化BL21感受态细胞后，经IPTG诱导表达，将获得的目的蛋白免疫BALB/c小鼠，将其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，并进行间接ELISA检测。结果显示，筛选出17株与分段表达的鸭RIG-Ⅰ蛋白有良好反应性的杂交瘤细胞株，测定单克隆抗体上清效价均为1：512；间接免疫荧光（IFA）与Western blotting分析结果显示，10H7C3和2A10A2 2株单克隆抗体与原核表达的鸭RIG-Ⅰ全长蛋白有良好的反应性。本研究制备了特异性鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体，为进一步研究RIG-Ⅰ基因的功能奠定了基础。

关键词: 维甲酸诱导蛋白Ⅰ; 单克隆抗体; 原核表达

Abstract: In order to prepare the monoclonal antibodies against duck retinoic acid inducible-gene Ⅰ(RIG-Ⅰ) full-length protein, the N-terminal a (1 to 900 bp)and b (751 to 1650 bp) segments of RIG-Ⅰ gene were amplified from cDNA of duck spleen and then cloned into the prokaryotic expression vector pET-30a. The recombinant plasmid was transformed into BL21 cells and expressed by IPTG inducing,then immuned BALB/c mice by the protein, and fused the spleen lymphocytes with SP2/0 myeloma cell, detected by indirect ELISA. 17 strains hybridoma cell lines which had good reactivity with duck RIG-Ⅰ protein were screened; the titer of monoclonal antibody supernatant was 1:512; 2 strains monoclonal antibody 10H7C3 and 2A10A2 had good reactivity with duck RIG-Ⅰfull-length protein detected by indirect immunofluorescence (IFA) and Western blotting. The specific murine anti-duck RIG-Ⅰ monoclonal antibodies that prepared in the study laid a foundation for further research of RIG-Ⅰ gene function.

Key words: RIG-Ⅰ; monoclonal antibody; prokaryotic expression

中图分类号:

S858.32

周长良, 张雅春, 王伟, 李越, 赵颖慧, 臧凤霞, 冉多良, 孟庆文, 陈洪岩. 鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ基因原核表达和单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(9): 20-24.

ZHOU Chang-liang, ZHANG Ya-chun, WANG Wei, LI Yue, ZHAO Ying-hui, ZANG Feng-xia, RAN Duo-liang, MENG Qing-wen, CHEN Hong-yan. Prokaryotic Expression of Duck Retinoic Acid inducible-gene Ⅰ and Preparation and Identification of Monoclonal Antibody against the Protein[J]. , 2014, 41(9): 20-24.

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