猪伪狂犬病病毒山西株胸苷激酶基因序列分析

中国畜牧兽医

猪伪狂犬病病毒山西株胸苷激酶基因序列分析

樊振华¹，孟帆¹，吴忻¹，刘文俊¹，姚敬明¹，王娟萍¹，韩一超¹，米瑞娟¹，雷宇平²

（1.山西省农业科学院畜牧兽医研究所，山西太原 030032；2.山西省动物疫病预防控制中心，山西太原 030024）

收稿日期:2013-09-25 出版日期:2014-04-20 发布日期:2014-05-27
通讯作者: 孟帆。E-mail:jcbyjs@sohu.com
作者简介:樊振华（1964—），男，山西人，学士，副研究员，研究方向：畜禽传染病。
基金资助:
山西省科技攻关项目（20110311034-3）。

Sequence Analysis of TK Gene of Porcine Pseudorabies Virus Isolated from Shanxi Area

FAN Zhen-hua¹, MENG Fan¹, WU Xin¹, LIU Wen-jun¹, YAO Jing-ming¹, WANG Juan-ping¹, HAN Yi-chao¹, MI Rui-juan¹, LEI Yu-ping²

(1.Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Shanxi Academy of Agricultural Sciences, Taiyuan 030032, China; 2.Shanxi Veterinary Prevention and Treatment Station, Taiyuan 030024, China)

Received:2013-09-25 Online:2014-04-20 Published:2014-05-27

摘要/Abstract

摘要： 采用PCR方法对2011—2013年山西省分离的2株猪伪狂犬病病毒（pseudorabies virus, PRV）的胸苷激酶（TK）基因进行了克隆和测序，并将其基因序列和推导的氨基酸序列与国内外主要流行毒株Bartha株、Becker株、Ea株、Kaplan株、LA株、Min-A株、NIA-3株、SH株、SL株和Yangsan株进行了同源性分析。序列分析结果表明，核苷酸同源性分别为99.7%、99.6%、99.8%、99.7%、99.7%、94.4%、99.1%、57.2%、99.5%、99.7%；氨基酸同源性分别为99.1%、99.1%、99.7%、99.4%、99.4%、90.3%、98.1%、49.7%、98.8%、99.1%。另外在核苷酸序列中起始密码子上游有3段GC box的序列，终止密码子下游有多聚腺苷加尾信号AATAAA；TK基因均由320个氨基酸组成，氨基酸序列中有疱疹病毒TK基因共同的保守序列-R*Y*DG**G*GK*T-和-FDRHP*A***C*P*AR-。

关键词: 猪伪狂犬病病毒; TK基因; 变异分析

Abstract: TK genes of two pseudorabies virus （PRV） strains that had been isolated from Shanxi province were amplified by RT-PCR among 2009 and 2011, cloned and sequenced. The obtained sequences and the deduced amino acid were analyzed and compared with the domestic and international major epidemic strains of PRV Bartha strain, Becker strain, Ea strain, Kaplan strain, LA strain, Min-A strain, NIA-3 strain, SH strain, SL strain and Yangsan strain by homologous analysis. Sequence analysis showed that the nucleotide homologies of TK genes were 99.7%, 99.6%, 99.8%, 99.7%, 99.7%, 94.4%, 99.1%, 57.2%, 99.5% and 99.7%, respectively, and the amino acid homologies were 99.1%, 99.1%, 99.7%, 99.4%, 99.4%, 90.3%, 98.1%, 49.7%, 98.8% and 99.1%. 3 sections of GC box like sequence upstream of the initiation codon and poly adenosine polyadenylation signal AATAAA downstream of the stop codon were found in nucleotide sequence, TK gene was composed of 320 amino acids,with a conserved sequence of TK gene of herpesvirus common amino acid sequence,namely -R*Y*DG**G*GK*T- and -FDRHP*A***C*P*AR-.

Key words: porcine pseudorabies virus; TK gene; variation analysis

樊振华，孟帆，吴忻，刘文俊，姚敬明，王娟萍，韩一超，米瑞娟，雷宇平. 猪伪狂犬病病毒山西株胸苷激酶基因序列分析[J]. 中国畜牧兽医.

FAN Zhen-hua, MENG Fan, WU Xin, LIU Wen-jun, YAO Jing-ming, WANG Juan-ping, HAN Yi-chao, MI Rui-juan, LEI Yu-ping. Sequence Analysis of TK Gene of Porcine Pseudorabies Virus Isolated from Shanxi Area[J]. .

参考文献

1 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所.动物传染病学［M］.北京:中国农业出版社，1999.
2 江云波，方六荣，肖少波，等. 表达猪繁殖与呼吸综合征病毒修饰型GP5m 蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其在小鼠的免疫反应［J］. 养殖与饲料，2005(11):7～14.
3 吴凤笋，李文刚，樊淑华. 应用伪狂犬病毒表达载体研制重组疫苗的研究进展［J］.郑州牧业工程高等专科学校学报，2006，26 (3):21～23.
4 陈瑞爱，邵定勇，韩静芳，等.猪伪狂犬病毒TK缺失株PRV/TK^-的构建及其生物学特性［J］.中国兽医学报，2010，30（5）：577～582.
5 周国辉，仇华吉，田志军，等.伪狂犬病病毒基因缺失及活载体疫苗研究进展［J］.动物医学进展，2005，26(3):19～22.
6 赵武，肖少波，方六荣，等. 融合表达牛疱疹病毒1型VP22及猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5 重组伪狂犬病毒TK2/gE2/VP22 GP5⁺的构建［J］. 病毒学报，2006，22 (1):62～66.
7 殷震，刘景华.动物病毒［M］.第2版.北京:科学出版社，1997.
8 萨姆布鲁克J，拉塞尔D W. 分子克隆实验指南［M］.黄培堂，王嘉玺，朱厚础等译. 北京:科学出版社，2002.
9 琚春梅，陈焕春，樊惠英，等. 猪2型圆环病毒ORF1与ORF2基因和伪狂犬病毒基因的重组与表达的研究［J］.生物工程学报，2005，21(3):370～374.
10 葛菡，程安春，汪铭书，等.疱疹病毒TK基因的研究进展［J］.中国兽医科学，2008，38(1):86～90.
11 Coen D M, Kosz-Vnenchak M, Jacobson J G, et al. Thymidine kinase-negative herpes simplex virus mutants establish latency in mouse trigeminal but do not reactivate［J］. Proc Natl Acad Sci USA, 1989，86(12): 4736～4740.
12 Darb Y G, Larder B A. Evidence that the‘active centre’of the herpes simplex virus thymidine kinase involves an interaction between three distinct regions of the polypeptide［J］.J Gen Virol, 1986, 67:753～758.
13 Dezelee S, Bras F, Vende P, et al. The BamHⅠfragment 9 of pseudorabies virus contains genes homologous to the UL24, UL25, UL26 and UL26.5 genes of herpes simplex virus type 1［J］. Virus Res, 1996, 42:27～39.
14 Loiacono C M, Myers R, Mitchell W J. The herpes simplex virus type learly gene (thymidine kinase) promoter is activated in neurons of brain, but not trigeminal ganglia, of transgenic mice in the absence of viral proteins［J］. J Neuro Virol, 2004, 10(2): 116～122.

[1]	张婧旭, 徐玉, 梁海英, 曾智勇, 汤德元, 王彬, 徐松平, 万娟, 祝羊. 伪狂犬病病毒贵州分离株与疫苗株遗传进化和抗原表位分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1093-1106.
[2]	谢思豪, 勾红潮, 卞志标, 李斌, 蔡汝健, 臧莹安, 李春玲. MLKL基因敲除对猪伪狂犬病病毒复制的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1934-1941.
[3]	张莉, 任卫科, 路超, 李秀丽, 李富强, 田向学, 池晶晶, 王利丽, 江珊, 董志民, 鄢明华. 2015－2020年天津地区猪伪狂犬病病毒gB、gC、gE基因遗传变异分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3741-3751.
[4]	高映雪, 蒋新华, 周荷田, 罗锋, 杨丹凤, 万文忠, 邓舜洲. 2013~2018年江西省猪伪狂犬病病毒流行株gE和gB基因遗传变异分析[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(1): 164-173.
[5]	贾刚, 樊梅娜, 谷巍. 猪伪狂犬病病毒gB蛋白表达及免疫原性分析[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(4): 1175-1181.
[6]	孙彦琴, 马震原, 闫若潜, 王东方, 曹伟伟, 郭育培. 猪流行性腹泻病毒与猪伪狂犬病病毒二重RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 《中国畜牧兽医》, 2016, 43(9): 2455-2460.
[7]	林群群, 郑小香, 陈鹏强, 陈秋勇, 曾显成, 胡崇伟, 修金生. 猪伪狂犬病病毒NP株gE、gI基因的克隆及序列分析[J]. 《中国畜牧兽医》---唯一指定的官方网站, 2015, 42(9): 2262-2269.
[8]	赵雪丽, 闫若潜, 吴志明, 曹伟伟, 王淑娟, 谢彩华, 马震原, 周兵强, 王东方. 鉴别猪伪狂犬病病毒gE基因缺失疫苗和野毒感染的二重PCR诊断方法的建立和应用[J]. , 2015, 42(4): 865-870.
[9]	张勋, 吴鹏, 李世震, 伏寅峰, 许追, 梁田, 杨素芳, 陈新凯, 齐亚银, 盛金良. 新疆地区4种猪病多重PCR检测方法的建立与初步应用[J]. , 2015, 42(10): 2612-2618.
[10]	尹秀凤，丁美娟，张海涛，秦进进，孙?，许秀梅，汪爱芬，张小飞，薛家宾. 猪伪狂犬病病毒的分离鉴定及免疫原性初步研究[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(4): 258-264.
[11]	王隆柏，张志刚，苏永裕，车勇良，吴学敏,周伦江. 5种猪病多重PCR检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(2): 21-25.
[12]	马力，杨丽梅，徐倩倩，王艳，张颖，张志美，郭时金，沈志强，王艳萍. 猪伪狂犬病病毒gE蛋白在野毒诊断中的应用进展[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(2): 249-253.
[13]	隋慧, 杨金生. 猪伪狂犬病病毒LX株的分离与鉴定[J]. , 2013, 40(6): 226-229.
[14]	韩勇. 检测猪伪狂犬病病毒和猪细小病毒的二重PCR方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2012, 39(9): 89-91.
[15]	王娟萍, 姚敬明, 赵喜有, 吴忻, 孟帆, 刘文俊, 樊振华, 米瑞娟. 猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型多重PCR检测方法的建立与应用[J]. 中国畜牧兽医, 2012, 39(8): 48-52.