昆明犬胎儿成纤维细胞系的建立及生物学特性分析

›› 2014, Vol. 41 ›› Issue (12): 161-166.

昆明犬胎儿成纤维细胞系的建立及生物学特性分析

韦云芳¹, 万九生¹, 李静², 陈方良¹, 王佳², 徐陶¹, 袁再美², 程鲁光¹, 富国文², 毛爱国¹, 潘伟荣², 岳锐¹, 唐树生¹, 魏红江^2,3

1. 公安部昆明警犬基地, 云南昆明 650204;
2. 云南农业大学动物科学技术学院, 云南昆明 650201;
3. 云南农业大学, 云南省动物营养与饲料重点实验室, 云南昆明 650201

收稿日期:2014-05-26 出版日期:2014-12-20 发布日期:2014-12-25
通讯作者: 唐树生, 魏红江 E-mail:hongjiangwei@126.com
作者简介:韦云芳(1986－),女,云南人,硕士,研究实习员,研究方向:警犬分子遗传育种. 万九生(1976－),男,江西人,硕士,副研究员,研究方向:警犬辅助繁殖生物技术研究与应用. 韦云芳和万九生对本文具有同等贡献,并列为第一作者.
基金资助:
公安部重点研究计划项目(201301ZDYJ005);公安部应用创新计划项目(2011YYCXKMJQ167).

Establishment and Biological Characteristics Analysis of Fetal Fibroblast Cell Lines in Kunming Dog

WEI Yun-fang¹, WAN Jiu-sheng¹, LI Jing², CHEN Fang-liang¹, WANG Jia², XU Tao¹, YUAN Zai-mei², CHENG Lu-guang¹, FU Guo-wen², MAO Ai-guo¹, PAN Wei-rong², YUE Rui¹, TANG Shu-sheng¹, WEI Hong-jiang^2,3

1. Kunming Police Dog Base, Ministry of Public Security, Kunming 650204, China;
2. College of Animal Science and Technology, Yunnan Agricultural University, Kunming 650201, China;
3. Key Laboratory of Animal Nutrition and Feed Science of Yunnan Province, Yunnan Agricultural University, Kunming 650201, China

Received:2014-05-26 Online:2014-12-20 Published:2014-12-25

摘要/Abstract

摘要： 本研究旨在探索和建立昆明犬胎儿成纤维细胞体外分离、培养的技术方法并观察其生物学特性.试验利用剖腹手术法获得发育30 d的昆明犬胎儿12个,性别鉴定结果为7公5母.公、母胎儿体尺和体重分别为:体长1.90 cm±0.14 cm和2.00 cm±0.05 cm,体宽0.90 cm±0.13 cm和0.90 cm±0.15 cm;体重0.68 g±0.17 g和0.66 g±0.06 g,差异均不显著(P>0.05).以昆明犬胎儿组织为材料,采用胶原酶消化法和细胞冷冻保存技术建立了昆明犬胎儿成纤维细胞系,并对所构建的细胞系进行生物学特性研究.结果表明,分离的胎儿成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态,生长曲线呈S型,倍增时间约为36 h;冻存前和复苏后的存活率分别为96.1%和94.6%;染色体核型分析显示2n=78(XY),并在体外培养多代后仍能保持正常核型.本研究建立的昆明犬胎儿成纤维细胞系可在体外快速贴壁生长、增殖,进行稳定培养,这不仅使昆明犬遗传资源在细胞水平得以保存,且所获成纤维细胞能作为相关研究中所需细胞的来源.

关键词: 昆明犬; 成纤维细胞; 生物学特性; 性别鉴定

Abstract: The objective of this study was to explore the method of isolation and cultivation of fibroblasts of Kunming dog in vitro. 12 fetus at 30th day in gestation of Kunming dog were obtained by laparotomy and the sex indentification of fetus were 7 males and 5 females. The body size and weight of fetus were measured. The results showed that male and female fetus of body length were 1.90 cm ± 0.14 cm and 2.00 cm ± 0.05 cm, body width were 0.90 cm ± 0.13 cm and 0.90 cm ± 0.15 cm, body weight were 0.68 g ± 0.17 g and 0.66 g ± 0.06 g, the difference was not significant (P>0.05). Additionally, the fetal fibroblast cell lines were successfully established by the method of collagenase digestion and cryopreservation. The research were designed to examine the biological characteristics of fibroblasts. The cells showed typical morphologic characteristics of fibrous and long spindle appearance. Analysis of the growth of the fibroblasts revealed a sigmoid curve with the population doubling time (PDT) of 36 h. Moreover, the average viability of the fetal fibroblasts was 96.1% before freezing and 94.6% after thawing. Karyotyping indicated the chromosome number of Kunming dog was 2n=78 (XY). In conclusion, the fetal fibroblast cell lines in Kunming dog were successfully established in vitro. It will not only preserve the genetic resources of Kunming dog at the cellular level but also provide valuable materials for further research.

Key words: Kunming dog; fibroblast cell; biological characteristics; sex identification

中图分类号:

Q813

韦云芳, 万九生, 李静, 陈方良, 王佳, 徐陶, 袁再美, 程鲁光, 富国文, 毛爱国, 潘伟荣, 岳锐, 唐树生, 魏红江. 昆明犬胎儿成纤维细胞系的建立及生物学特性分析[J]. , 2014, 41(12): 161-166.

WEI Yun-fang, WAN Jiu-sheng, LI Jing, CHEN Fang-liang, WANG Jia, XU Tao, YUAN Zai-mei, CHENG Lu-guang, FU Guo-wen, MAO Ai-guo, PAN Wei-rong, YUE Rui, TANG Shu-sheng, WEI Hong-jiang. Establishment and Biological Characteristics Analysis of Fetal Fibroblast Cell Lines in Kunming Dog[J]. , 2014, 41(12): 161-166.

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