3种死菌悬液制备方法对PMA-qPCR结果的影响

›› 2014, Vol. 41 ›› Issue (12): 15-19.

3种死菌悬液制备方法对PMA-qPCR结果的影响

王慧党¹, 温书香¹, 王慧勤², 曹旭东³, 陈创夫¹

1. 石河子大学动物科学学院, 新疆石河子 832003;
2. 石河子大学生命科学学院, 新疆石河子 832003;
3. 石河子大学医学院, 新疆石河子 832003

收稿日期:2014-06-30 出版日期:2014-12-20 发布日期:2014-12-25
通讯作者: 陈创夫 E-mail:ccf-xb@163.com
作者简介:王慧党(1987－),女,河南人,硕士生,研究方向:畜禽病原分子生物学.
基金资助:
国家科技重大专项(2013ZX10003003-002).

Effects of Three Kinds of Dead Bacterial Suspension Preparation Methods on the Results of PMA-qPCR

WANG Hui-dang¹, WEN Shu-xiang¹, WANG Hui-qin², CAO Xu-dong³, CHEN Chuang-fu¹

1. College of Animal Science and Technology, Shihezi University, Shihezi 832003, China;
2. College of Life Sciences, Shihezi University, Shihezi 832003, China;
3. School of Medicine, Shehezi University, Shehezi 832003, China

Received:2014-06-30 Online:2014-12-20 Published:2014-12-25

摘要/Abstract

摘要： 本试验利用热灭活致死法、超声裂解致死法和紫外线照射法3种制备结核分支杆菌死菌悬液的方法,比较不同灭菌方法制备的死菌对PMA-qPCR偶联技术结果的影响,选择结核分支杆菌死菌悬液的最佳制备方法制备后续试验中用到的结核分支杆菌死菌;探索PMA-qPCR偶联技术的适用范围和局限性.结果表明,热灭活法和超声裂解致死法制备的结核分支杆菌死菌悬液影响PMA-qPCR检测的Ct值的变化;紫外线照射法制备的结核分支杆菌死菌悬液对PMA-qPCR检测的Ct值没有影响;热灭活法是制备结核分支杆菌死菌悬液的最佳方法;PMA-qPCR偶联技术不适用于细胞膜无损伤致死法制备死菌的检测.

关键词: PMA-qPCR偶联技术; 热灭活; 超声; 紫外线照射

Abstract: In the assay, we used heat inactivation, ultrasonic cracking and ultraviolet irradiation three methods to prepare the death bacterial suspension of Mycobacterium tuberculosis, compared the effects of these three methods on the result of PMA-qPCR coupling technology. To choose the best preparation method of the dead bacterial suspension for subsequent experiments and explore the scopes of application and limitations of PMA-qPCR detection technology. The results showed that dead bacterial suspensions prepared by both methods of heat inactivation and ultrasonic cracking affected the changes of Ct values detected by PMA-qPCR. The dead bacterial suspension prepared by ultraviolet irradiation method had no effect on Ct values of PMA-qPCR detection technology.Heat inactivation method was the best method for the preparation of bacterial suspension of died Mycobacterium tuberculosis.PMA-qPCR coupling method was not suitable for the detection of dead bacteria prepared by the lethal method without cell membrane injury.

Key words: PMA-qPCR coupling technology; heat inactivation; ultrasonic cracking; ultraviolet irradiation

中图分类号:

王慧党, 温书香, 王慧勤, 曹旭东, 陈创夫. 3种死菌悬液制备方法对PMA-qPCR结果的影响[J]. , 2014, 41(12): 15-19.

WANG Hui-dang, WEN Shu-xiang, WANG Hui-qin, CAO Xu-dong, CHEN Chuang-fu. Effects of Three Kinds of Dead Bacterial Suspension Preparation Methods on the Results of PMA-qPCR[J]. , 2014, 41(12): 15-19.

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