Ⅰ型鸭肝炎病毒VP3基因的克隆及原核表达

›› 2013, Vol. 40 ›› Issue (10): 33-37.

Ⅰ型鸭肝炎病毒VP3基因的克隆及原核表达

李露^1,2, 程英杰^2,3, 李传峰², 陈宗艳², 孟春春², 何后军¹, 刘光清²

1. 江西农业大学动物科技学院, 江西南昌 330045;
2. 中国农业科学院上海兽医研究所, 上海 200241;
3. 甘肃农业大学动物医学院, 甘肃兰州 730070

收稿日期:2013-01-06 出版日期:2013-10-20 发布日期:2013-12-19
通讯作者: 刘光清 E-mail:liugq@shvri.ac.cn何后军。E-mail:hehoujun@163.com
作者简介:李露(1989-),女,江西人,硕士生,研究方向:禽病毒分子生物学。
基金资助:
国家自然科学基金项目(31101848,31270194);公益性农业科研专项(201003012);"863"计划 (2011AA10A200);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2012JB06,2012JB13)。

Cloning and Prokaryotic Expression of VP3 Gene of Duck Hepatitis Virus Ⅰ

LI Lu^1,2, CHENG Ying-jie^2,3, LI Chuan-feng², CHEN Zong-yan², MENG Chun-chun², HE Hou-jun¹, LIU Guang-qing²

1. College of Animal Science and Technology, Jiangxi Agricultural University, Nanchang 330045, China;
2. Shanghai Veterinary Research Institute, CAAS, Shanghai 200241, China;
3. College of Veterinary Medicine, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China

Received:2013-01-06 Online:2013-10-20 Published:2013-12-19

摘要/Abstract

摘要： 采用RT-PCR方法从Ⅰ型鸭肝炎病毒ZJ-Ⅴ株中扩增VP3基因,运用DNAStar软件对VP3序列与参考序列的同源性进行比对,并进行了遗传进化分析,然后将VP3基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得重组表达质粒pET-VP3,转化宿主菌E.coli Rosetta(DE3),经1 mmol/L IPTG诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting方法对表达产物进行检测。结果显示,成功克隆了DHV-Ⅰ VP3基因,片段大小为711 bp。序列分析结果表明,ZJ-Ⅴ株VP3与其他A型DHV分离株的同源性较高,为95.1%~97.7%;而与C型DHV分离株的同源性较低,为71.3%~72.6%;与B型DHV分离株的VP3基因同源性最差,为70.3%~70.5%。SDS-PAGE和Western blotting检测结果显示,重组VP3基因在大肠杆菌细胞(DE3)中获得了良好表达,其分子质量约为47 ku;与抗Ⅰ型鸭肝炎病毒ZJ-Ⅴ株阳性血清发生特异性免疫反应,表明重组VP3蛋白具有良好免疫原性。

关键词: Ⅰ型鸭肝炎病毒; VP3基因; 原核表达; 序列分析

Abstract: The VP3 gene of duck hepatitis virus type 1 (DHV-1) was amplified by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), compared with the reference sequences and analyzed genetically using DNAStar software. The acquired VP3 gene was cloned into the prokaryotic expression vector pET32a(+). The resultant pET-VP3 was transformed into E.coli Rosetta(DE3) cell and induced with 1mM IPTG. The expression product was analyzed by SDS-PAGE and Western blotting. The results showed that the VP3 gene was successfully cloned with 711bp in length. Sequences analysis results indicated that the VP3 gene of DHV-1 ZJ-V strain has a higher sequence identify with the other DHV genotype A isolates ranging from 95.1% to 97.7%, a lower sequence identify with the other DHV genotype C isolates ranging from 71.3% to 72.6%, and the lowest sequence identify with the other DHV genotype B isolates ranging from 70.3% to 70.5%. the results of SDS-PAGE and Western blotting revealed that the recombinant VP3 protein with a relative molecular mass of 47ku, can be expressed in the E.coli Rosetta(DE3) cell and recognized by positive serum against DHV-I ZJ-V strain, showing good immunogenicity.

Key words: duck hepatitis virusⅠ; VP3 gene; prokaryotic expression; sequence analysis

中图分类号:

Q785

李露, 程英杰, 李传峰, 陈宗艳, 孟春春, 何后军, 刘光清. Ⅰ型鸭肝炎病毒VP3基因的克隆及原核表达[J]. , 2013, 40(10): 33-37.

LI Lu, CHENG Ying-jie, LI Chuan-feng, CHEN Zong-yan, MENG Chun-chun, HE Hou-jun, LIU Guang-qing. Cloning and Prokaryotic Expression of VP3 Gene of Duck Hepatitis Virus Ⅰ[J]. , 2013, 40(10): 33-37.

参考文献

1 向毅勇,罗薇,靳艳玲,等. 鸭肝炎病毒鸡胚化弱毒MY株VP1基因克隆、原核表达及抗原性分析 [J]. 中国畜牧兽医, 2010, 37(12): 68~73.
2 廖俊伟,张小飞,黄显明,等. Ⅰ型鸭肝炎病毒VP3基因的克隆与原核表达[J]. 动物医学进展, 2009,30(7):49~52.
3 Saif Y M.高福,苏敬良,索勋,译.禽病学[M]. 第11版.北京:中国农业出版社,2004.
4 Ding C, Zhang D. Molecular analysis of duck hepatitis virus type 1[J]. Virology, 2007,361(1):9~17.
5 Kim M C, Joh S J, Kwon Y K, et al. Molecular analysis of duck hepatitis virus type 1 reveals a novel lineage close to the genus Parechovirus in the family Picornaviridae[J]. J Gen Virol, 2006,87: 3307~3316.
6 Kim M C, Joh S J, Kwon Y K, et al. Recent Korean isolates of duck hepatitis virus revealed the presence of a new geno and serotype when compared to duck hepatitis virus type 1 type strains[J]. Arch Virol,2007, 152: 2059~2072.
7 Mccahon D, Belsham G J, Crowther J R, et al. Evidence for at least four antigenic sites on type O foot-and-mouth disease virus involved in neutralization,identification by single and multiple site monoclonal antibody-resistant mutants[J]. J Gen Virol, 1989, 70: 639~645.
8 Muir P, Korn K, Kammerer U, et al. Molecular typing of enteroviruses: Current status, future requirements[J]. Clin Microbiol Rev, 1998, 11(1): 202~227.
9 Spanjaard R A, Van D J. Translation of the sequence AGG-AGG yields 50% ribosomal frameshit[J]. Proc Natl Acad Science USA, 1988, 85(21): 7967~7971.
10 Tseng C H, Tsai H J. Molecular characterization of a new serotype of duck hepatitis virus[J]. Virus Research, 2007a, 126(1~2): 19~31.
11 Tseng C H, Know Les N J, Tsai H J. Molecular analysis of duck hepatitis virus type Ⅰ in dicates that it should be assigned to a new genus[J]. Virus Research, 2007b, 123(2): 190~203.

[1]	焦琳琳, 成玉婷, 吴庆国, 吴双, 吴植, 朱善元, 钱莺娟. 鸭坦布苏病毒Capsid蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2395-2402.
[2]	李灿, 李楚楚, 曾维, 张宁, 纪春晓, 陈韬. 猪RegⅢγ蛋白的重组表达及功能研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2414-2426.
[3]	宋越, 苏胜杰, 张帆, 白帆, 戴伶俐, 王娜, 王大伟, 杨茜雯, 赵世华, 张月梅. 溶血性曼氏杆菌截短型白细胞毒素的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2479-2486.
[4]	张芳源, 蔺雅婷, 杨大为, 陈虎, 李桂梅, 单虎. 非洲猪瘟病毒P30蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2012-2022.
[5]	王雪平, 张孝俊, 李晓月, 王国栋, 张福良, 宋玉伟, 张明亮, 马磊. 高致病性禽腺病毒血清4型Hexon蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2053-2060.
[6]	胡乐玉, 胡欣瑶, 李颖, 赵盛淼, 沈凤臻, 王长法, 李亮亮, 王彤彤, 任慧英. 德州驴HO-1基因生物信息学分析及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1499-1510.
[7]	王文婕, 茹鹏辉, 郁川, 杜付熙, 陈松彪, 尚珂, 张春杰, 程相朝. 猫细小病毒洛阳分离株VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1511-1521.
[8]	刘家兴, 韩雪英, 张鑫茹, 邓嘉昕, 姚伦广, 刘阳坤. 携带猪流行性腹泻病毒抗原表位的铁蛋白纳米颗粒制备与免疫原性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1567-1574.
[9]	贾新月, 马静, 张艳艳, 马勋, 王正荣, 薄新文. 细粒棘球绦虫EGR-07243和EGR-07244基因生物信息学分析及原核表达[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 847-858.
[10]	章志涛, 李祥龙, 孔令丽, 罗雨昕, 王冬英. 大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A的原核表达及不同时期表达水平分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1107-1117.
[11]	甘露, 郑会珍, 诺明达来, 刘燕, 金敏, 何文文, 温丽翠, 李永畅, 巴音查汗·盖力克. 伊氏锥虫伊犁株扩繁及其PFR基因克隆表达和生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 469-478.
[12]	吕双飞, 马勋, 王静, 孔翠莲, 寇丽君, 刘彩霞, 史唯地, 康立超, 任慧杰. 炭疽芽孢杆菌PA-LF1融合蛋白的原核表达及其反应原性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 674-683.
[13]	张凯, 张春平, 戈胜强, 孙春喜, 程杰, 伏春雨, 王刚, 牛星, 彭军. 非洲猪瘟病毒p22蛋白表达、多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 270-279.
[14]	朱丽霖, 王后坤, 陈雪阳, 刘晶, 梁雄燕, 方春, 杨玉莹. 鸡IFIT5对J亚群禽白血病病毒在DF-1细胞内复制的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 310-316.
[15]	王宇琛, 田广原, 周雅坪, 郭婷, 赵红梅, 孙雅婕, 赵逢淼, 卞宇晨, 于佳梁, 郝永清. BPIV3 NP蛋白的原核表达及其对BPIV3灭活疫苗免疫增强作用的研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(8): 3122-3130.