兔病毒性出血症病毒重组蛋白VP60间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

›› 2013, Vol. ›› Issue (7): 69-72.

兔病毒性出血症病毒重组蛋白VP60间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

李云琴¹, 赵美盈¹, 刁富花²

1. 青海省大通县长宁镇畜牧兽医工作站, 青海大通 810105;
2. 青海省大通县后子河畜牧兽医站, 青海大通 810105

收稿日期:2012-11-06 出版日期:2013-07-20 发布日期:2013-07-24
作者简介:李云琴(1982-),女,青海人,学士,助理兽医师,研究方向:兽医临床。

Development and Application of an Indirect ELISA for Detecting Antibodies to Rabbit Hemorrhagic Disease Virus Using Recombinant Truncated VP60 Protein

LI Yun-qin¹, ZHAO Mei-ying¹, DIAO Fu-hua²

1. Changning Veterinary Station in Datong County Qinghai Province, Datong 810105, China;
2. The Station of Veterinary of Houzihe in Datong County Qinghai Province, Datong 810105, China

Received:2012-11-06 Online:2013-07-20 Published:2013-07-24

摘要/Abstract

摘要： 为建立一种快速的兔病毒性出血症病毒抗体检测方法,本研究以原核表达的重组VP60蛋白作为诊断抗原,建立了检测兔病毒性出血症病毒抗体的VP60-ELISA诊断方法。该方法检测3种常见兔病(兔轮状病毒、仙台病毒和魏氏梭菌)的阳性血清均为阴性;检测灵敏度为1:12800;批内、批间重复性试验的变异系数分别小于4.9%和6.9%。本研究建立的RHDV VP60-ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为RHDV的抗体检测及流行病学调查等快速诊断提供了一种技术手段。

关键词: 兔病毒性出血症病毒; VP60蛋白; 间接ELISA

Abstract: To develop a method to detect the antibody of rabbit hemorrhagic disease virus, an indirect ELISA was successfully developed to detect anti-RHDV antibody using recombinant VP60 protein as coating antigen. The method detected the positive sera of other three rabbit diseases(LaRV,SeV,Cl.welchii) were negative. Lowest antibody titer of positive control serum was 1:12800. Coefficient of variability percent (C.V%) of intro-batch and inter-batch duplicative tests were less than 4.9% and 6.9%, respectively. Therefore, the VP60-ELISA had good specificity, sensitivity and repeatability, which provided a technical means of rapid diagnosis for RHDV antibody detection and epidemiological investigation.

Key words: rabbit hemorrhagic disease virus; VP60 protein; indirect ELISA

中图分类号:

S852.4

李云琴, 赵美盈, 刁富花. 兔病毒性出血症病毒重组蛋白VP60间接ELISA抗体检测方法的建立与应用[J]. , 2013, (7): 69-72.

LI Yun-qin, ZHAO Mei-ying, DIAO Fu-hua. Development and Application of an Indirect ELISA for Detecting Antibodies to Rabbit Hemorrhagic Disease Virus Using Recombinant Truncated VP60 Protein[J]. , 2013, (7): 69-72.

参考文献

1 刘怀然, 秦海斌, 刘家森, 等. 兔出血症病毒单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 中国兽医科学, 2009,39(2):145~149.
2 刘胜江, 薛华平, 蒲伯清, 等. 一种新的家兔病毒病——兔病毒性出血症[J]. 畜牧与兽医, 1984, 16:253~255.
3 朱海侠,万春和,黄瑜,等. 鸭出血症病毒间接ELISA检测方法的建立与应用[J].中国畜牧兽医, 2013, 40(2): 41~44.
4 周文伟, 刘月环. 实验兔出血症病毒检测方法的建立与免疫效果调查[J]. 中国比较医学杂志, 2010, 20(4):59~62.
5 祖立闯, 沈志强, 李娇, 等. 兔病毒性出血症病毒VP60蛋白在诊断与亚单位疫苗应用中研究进展[J]. 畜牧与兽医, 2012, 44(9):100~102.
6 隋慧. 兔出血症病毒VP60基因的表达及其免疫原性研究[J]. 中国农学通报, 2012, 28(11):86~88.
7 董婷, 王芳, 熊富强, 等. 兔出血症病毒双夹心ELISA 检测方法的建立[J]. 江苏农业学报, 2011, 27(3): 571~576.
8 Abrantes J, Van Der Loo W, Le Pendu J,et al. Rabbit haemorrhagic disease (RHD) and rabbit haemorrhagic disease virus (RHDV): A review[J]. Vet Res, 2012, 3(1):12.
9 Alda F, Gaitero T, Suárez M, et al. Evolutionary history and molecular epidemiology of rabbit haemorrhagic disease virus in the Iberian Peninsula and Western Europe[J].BMC Evol Biol, 2010, 10:347.
10 Gould E A. First case of rabbit haemorrhagic disease in Canada: Contaminated flying insect, vs. long-term infection hypothesis[J]. Mol Ecol, 2012,21(5):1042~1047.
11 Kerr P J, Kitchen A, Holmes E C. Origin and phylodynamics of rabbit hemorrhagic disease virus[J]. J Virol, 2009, 83(23):12129~12138.
12 Kinnear M, Linde C C. Capsid gene divergence in rabbit hemorrhagic disease virus[J]. J Gen Virol, 2010,91(1):174~181.
13 Le Gall-Recule G, Zwingelstein F, Boucher S, et al. Detection of a new variant of rabbit haemorrhagic disease virus in France[J]. Vet Rec,2011,168(5):137~138.
14 Ma W, Yu L. Analysis of two VP60 capsid protein genes of rabbit hemorrhagic disease virus from viruses obtained from the same farm[J]. Arch Virol, 2010,155(9):1497~1501.
15 Meyers G, Wirblich C, Thiel H J. Genomic and subgenomic RNAs of rabbit hemorrhagic disease virus are both protein-linked and packaged into particles[J]. Virology, 1991,184 (2):677~686.
16 Spibey N, McCabe V J, Greenwood N M, et al. Novel bivalent vectored vaccine for control of myxomatosis and rabbit haemorrhagic disease[J]. Vet Rec, 2012,170(12):309.

[1]	张芳源, 蔺雅婷, 杨大为, 陈虎, 李桂梅, 单虎. 非洲猪瘟病毒P30蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2012-2022.
[2]	牛小杰, 徐明国, 肖莉, 刘文豪, 陈创夫, 王勇. 鸡白痢沙门氏菌IPAJ蛋白的表达纯化、多克隆抗体制备及ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1218-1228.
[3]	张凯, 张春平, 戈胜强, 孙春喜, 程杰, 伏春雨, 王刚, 牛星, 彭军. 非洲猪瘟病毒p22蛋白表达、多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 270-279.
[4]	韩瑞, 杨行, 张文波, 陈佳玲, 周晓丽. 猪链球菌自溶素的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(9): 3508-3519.
[5]	张文燕, 王亚文, 袁晨, 冯亚文, 滕召剑, 商佳亮, 逯纪成, 宋勤叶. 基于非洲猪瘟病毒截短p72蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(7): 2688-2697.
[6]	田广原, 王宇琛, 周雅坪, 郭婷, 赵红梅, 赵逢淼, 孙雅婕, 卞宇晨, 于佳梁, 周雨霞. 绵羊肺炎支原体P60_58aa-928aa蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1960-1969.
[7]	陈静, 吴燕, 李梅, 岳筠, 朱二鹏, 文明, 张双翔, 程振涛. 丝状支原体山羊亚种LPPA蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 318-327.
[8]	王治平, 张云静, 孙玉洁, 徐鑫, 汪志艳, 黄柏成, 田克恭. 基于单克隆抗体捕获的猪血清和乳汁中PEDV IgA抗体间接ELISA方法的建立和评估[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(7): 2248-2255.
[9]	苏倩, 冯陈晨, 赵学亮, 王金玲, 王文龙, 呼和巴特尔. 骆驼斯氏副柔线虫病间接ELISA检测方法的建立[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(6): 1756-1763.
[10]	赵鹭, 葛志毅, 刘永生, 李学瑞, 曹小安. 羊种布鲁氏菌wzt基因的原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2019, 46(12): 3707-3714.
[11]	宋宏新, 韩波, 李珊, 薛海燕. 检测牛乳κ-酪蛋白的间接竞争ELISA法与间接ELISA法比较[J]. 《中国畜牧兽医》, 2018, 45(4): 1114-1119.
[12]	吴竞, 王西西, 吴映彤, 任肖, 郭晓宇. 非洲猪瘟病毒p30基因的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立[J]. 《中国畜牧兽医》, 2018, 45(12): 3555-3562.
[13]	贾琦珍, 陈根元, 王连群, 亚森·麦麦提, 王帅. 苦马豆素单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(7): 2155-2159.
[14]	王园园, 潘丽, 吕建亮, 张中旺. 猪A型口蹄疫病毒特异性IgA抗体间接ELISA检测方法的建立与初步应用[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(6): 1818-1824.
[15]	王莉, 沙洲, 李诗语, 梁佳茗, 王兴龙. 空肠弯曲菌PEB1A蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(12): 3605-3611.