番鸭细小病毒NS2原核表达载体的构建

›› 2010, Vol. 37 ›› Issue (4): 88-90.

番鸭细小病毒NS2原核表达载体的构建

阮二垒¹，杨丽云³，陈芳艳²，陈瑞爱¹，王林川^1,3

（1.广东大华农动物保健品股份有限公司，新兴 527400；2.华南农业大学动物科学学院，广州 510642； 3.华南农业大学兽医学院，广州 510642）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-04-20 发布日期:2010-04-20
通讯作者: 王林川

Construction of Protokaryotic Expressing Vector Containing NS2 of Muscovy Duck Parvovirus

RUAN Er-lei¹，YANG Li-yun³， CHEN Fang-yan²，CHEN Rui-ai¹，WANG Lin-chuan^1,3

（1.Guangdong Dahuanong Animal Health Products Co. Ltd, Xinxing 527400, China;2.College of Animal Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China;3.College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China）

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-04-20 Published:2010-04-20
Contact: WANG Lin-chuan

摘要/Abstract

摘要： 根据已发表的番鸭细小病毒(MDPV)核苷酸序列设计并合成1对引物，对MDPV非结构蛋白NS2基因进行扩增。所获得的PCR产物与预期片段大小相符，约1.4 kb。将该片段直接与pMD18-T载体连接，转化入感受态大肠杆菌DH5α中增殖。在对所提质粒进行快速鉴定、PCR扩增及BamH I酶切线性化初步鉴定的基础上，经限制性内切酶BamH I和Sal I进行双酶切鉴定。将克隆产物pMD18-T-NS2与原核表达载体pET-32a分别用BamH I和SalI双酶切后，回收目的片段进行定向连接，并转化入感受态大肠杆菌DH5α中。对所获得的重组质粒分别经BamH I单酶切、BamH I和Sal I双酶切，证实含有目的基因，且基因插入方向正确，成功构建了含有MDPV NS2非结构蛋白基因的原核表达载体，为高效原核表达及研制更为有效的基因工程疫苗打下了基础。

关键词: 番鸭细小病毒; NS2基因; 原核表达; 载体构建

Abstract: In this study, a pair of primers were designed according to the published DNA sequence of MDPV and was used to amplify the NS2 gene of MDPV by polymerase chain reaction（PCR）. The PCR product was then cloned into the vector pMD18-T. In order to construct a prokaryotic expression vector containing the NS2 gene of MDPV, double digestion（BamH I and Sal I）were performed to deal with pMD18-T and pET-32a respectively for the directional ligation of the two fragments. The following restriction endonuclease analysis has proved the correctness of the expression vector. Construction of the prokaryotic expression vector has laid the foundation of the expression of NS2 protein and the development genetically engineering vaccine.

Key words: MDPV; NS2 gene; prokaryotic expression; vector construction

中图分类号:

阮二垒;杨丽云;陈芳艳;陈瑞爱;王林川;. 番鸭细小病毒NS2原核表达载体的构建[J]. , 2010, 37(4): 88-90.

RUAN Er-lei;YANG Li-yun;CHEN Fang-yan;CHEN Rui-ai;WANG Lin-chuan;. Construction of Protokaryotic Expressing Vector Containing NS2 of Muscovy Duck Parvovirus[J]. , 2010, 37(4): 88-90.

[1]	焦琳琳, 成玉婷, 吴庆国, 吴双, 吴植, 朱善元, 钱莺娟. 鸭坦布苏病毒Capsid蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2395-2402.
[2]	李灿, 李楚楚, 曾维, 张宁, 纪春晓, 陈韬. 猪RegⅢγ蛋白的重组表达及功能研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2414-2426.
[3]	宋越, 苏胜杰, 张帆, 白帆, 戴伶俐, 王娜, 王大伟, 杨茜雯, 赵世华, 张月梅. 溶血性曼氏杆菌截短型白细胞毒素的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2479-2486.
[4]	张芳源, 蔺雅婷, 杨大为, 陈虎, 李桂梅, 单虎. 非洲猪瘟病毒P30蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2012-2022.
[5]	王雪平, 张孝俊, 李晓月, 王国栋, 张福良, 宋玉伟, 张明亮, 马磊. 高致病性禽腺病毒血清4型Hexon蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2053-2060.
[6]	胡乐玉, 胡欣瑶, 李颖, 赵盛淼, 沈凤臻, 王长法, 李亮亮, 王彤彤, 任慧英. 德州驴HO-1基因生物信息学分析及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1499-1510.
[7]	王文婕, 茹鹏辉, 郁川, 杜付熙, 陈松彪, 尚珂, 张春杰, 程相朝. 猫细小病毒洛阳分离株VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1511-1521.
[8]	刘家兴, 韩雪英, 张鑫茹, 邓嘉昕, 姚伦广, 刘阳坤. 携带猪流行性腹泻病毒抗原表位的铁蛋白纳米颗粒制备与免疫原性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1567-1574.
[9]	贾新月, 马静, 张艳艳, 马勋, 王正荣, 薄新文. 细粒棘球绦虫EGR-07243和EGR-07244基因生物信息学分析及原核表达[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 847-858.
[10]	章志涛, 李祥龙, 孔令丽, 罗雨昕, 王冬英. 大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A的原核表达及不同时期表达水平分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1107-1117.
[11]	甘露, 郑会珍, 诺明达来, 刘燕, 金敏, 何文文, 温丽翠, 李永畅, 巴音查汗·盖力克. 伊氏锥虫伊犁株扩繁及其PFR基因克隆表达和生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 469-478.
[12]	吕双飞, 马勋, 王静, 孔翠莲, 寇丽君, 刘彩霞, 史唯地, 康立超, 任慧杰. 炭疽芽孢杆菌PA-LF1融合蛋白的原核表达及其反应原性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 674-683.
[13]	张凯, 张春平, 戈胜强, 孙春喜, 程杰, 伏春雨, 王刚, 牛星, 彭军. 非洲猪瘟病毒p22蛋白表达、多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 270-279.
[14]	朱丽霖, 王后坤, 陈雪阳, 刘晶, 梁雄燕, 方春, 杨玉莹. 鸡IFIT5对J亚群禽白血病病毒在DF-1细胞内复制的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 310-316.
[15]	王宇琛, 田广原, 周雅坪, 郭婷, 赵红梅, 孙雅婕, 赵逢淼, 卞宇晨, 于佳梁, 郝永清. BPIV3 NP蛋白的原核表达及其对BPIV3灭活疫苗免疫增强作用的研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(8): 3122-3130.