带有绿色荧光蛋白外源DNA转染绵羊成纤维细胞的研究

›› 2009, Vol. 36 ›› Issue (12): 67-69.

带有绿色荧光蛋白外源DNA转染绵羊成纤维细胞的研究

安星兰，王子竹，张志崇，曲丽威，王春生，朴善花,安铁洙

（东北林业大学生命科学学院，哈尔滨 150040）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-12-20 发布日期:2009-12-20
通讯作者: 安铁洙

Study on Transfect Sheep Fibroblasts by DNA with GFP

AN Xing-lan, WANG Zi-zhu, ZHANG Zhi-chong, QU Li-wei, WANG Chun-sheng, PIAO Shan-hua, AN Tie-zhu

(College of Life Science, Northeast Forestry University, Harbin 150040, China)

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-12-20 Published:2009-12-20
Contact: AN Tie-zhu

摘要/Abstract

摘要： 为了优化建立转染绵羊成纤维细胞系的外源基因转染体系，本研究利用带有绿色荧光蛋白（GFP）的外源基因，采用阳离子脂质体法，探讨了DNA用量、脂质体用量和转染时间等因素对转染绵羊成纤维细胞的影响。结果表明，在500 μL转染培养基中成纤维细胞达到85%汇合时，添加由50 μL DMEM中含有0.2 μg DNA和50 μL DMEM中含有2.0 μL LipofectamineTM 2000的两种溶液混合构成的转染液并转染12 h，可获得最高的转染效率。当转染12 h后，用基础培养液培养至第24小时，细胞核周区出现强绿色荧光，而当转染后48～64 h观察时，细胞核周区的荧光强度明显弱，而远离核周区的胞质中的荧光强度增加。

关键词: 质粒DNA; 绵羊成纤维细胞; 转染; 脂质体法

Abstract: In order to establish highly efficient system of transfected sheep fibroblast, cationic liposome method was used to transfect subcultured 3 to 5 passage ovine fibroblasts by plasmids with green fluorescence protein (GFP) report gene, with the view of confirming the best transfection method and its optimization. Results showed that transfection efficiency could get maximal with 0.2 μg DNA and 2.0 μL LipofectamineTM 2000 in 12 hours under the circumstance of using plasmid DNA taken by Plasmid Purification Mini Kit-spin column. Green fluorescence near the nucleus became dimmer and dimmer with the lapse of time after the initial strong expression, on the contrary, it enhanced gradually in the cytoplasm.

Key words: plasmid DNA; sheep fibroblasts; transfection; cationic liposome method

中图分类号:

Q813

安星兰;王子竹;张志崇;曲丽威;王春生;朴善花;安铁洙. 带有绿色荧光蛋白外源DNA转染绵羊成纤维细胞的研究[J]. , 2009, 36(12): 67-69.

AN Xing-lan;WANG Zi-zhu;ZHANG Zhi-chong;QU Li-wei;WANG Chun-sheng;PIAO Shan-hua;AN Tie-zhu. Study on Transfect Sheep Fibroblasts by DNA with GFP[J]. , 2009, 36(12): 67-69.

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