高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1株Nsp2基因分段克隆表达及其单克隆抗体的制备

›› 2009, Vol. 36 ›› Issue (10): 39-43.

高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1株Nsp2基因分段克隆表达及其单克隆抗体的制备

胡鸿惠^1,2，曹振²，赵铁柱²，王斌³，秦亚嫚²，杨璐²，王传彬²，陈西钊²，田克恭^2

（1.中国农业大学动物医学院，北京 100193； 2.中国动物疫病预防控制中心，北京 100125；3.北京市动物卫生监督所，北京 100044）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-10-20 发布日期:2009-10-20
通讯作者: 田克恭

Expression and Development of Monoclonal Antibody against Nsp2 Gene Fragments of Highly Virulent PRRSV JXA1 Strain

HU Hong-hui^1,2, CAO Zhen², ZHAO Tie-zhu², WANG Bin³, QIN Ya-man²,
YANG Lu², WANG Chuan-bin², CHEN Xi-zhao², TIAN Ke-gong²

(1.College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100193, China; 2.China Animal Disease Control Center, Beijing 100125, China; 3.Beijing Animal Health Inspection Institute, Beijing 100044, China）

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-10-20 Published:2009-10-20
Contact: TIAN Ke-gong

摘要/Abstract

摘要： 分析猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）非结构蛋白Nsp2，扩增和克隆JXA1株Nsp2基因的4个片段，并将它们分别插入pGEX-6P-1表达载体构建重组表达质粒，经IPTG 诱导表达得到蛋白，纯化后进行活性鉴定。以分段表达的蛋白为抗原，建立间接ELISA方法用于杂交瘤细胞株的筛选。用PRRSV NVDC-JXA1株灭活疫苗对BALB/c小鼠进行常规免疫，最后一次用活毒加强免疫，取其脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合，经过选择性培养、有限稀释筛选到1株针对Nsp2的杂交瘤细胞株6B8。鉴定结果表明，该株杂交瘤细胞仅与4个蛋白片段中的Nsp2F1有反应，细胞经长期体外培养和冻存后复苏能稳定分泌抗体，上清效价达1∶210，腹水效价达1∶106。本研究成功表达了4个PRRSV JXA1株的非结构蛋白Nsp2的片段，以其为抗原建立筛选方法，得到1株针对Nsp2的单克隆抗体，为研究Nsp2功能和建立相关诊断方法奠定物质基础。

关键词: PRRSV JXA1; Nsp2; 单克隆抗体

Abstract: Analyzing PRRSV gene Nsp2 by biological software, four gene fragments of Nsp2 were successfully amplified by RT-PCR and cloned from the PRRSV JXA1 strain. Their expressing plasmids were constructed by inserting the target gene fragments into pGEX-6P-1 vector and were induced with IPTG. Subsequently, the collecting and purifying proteins were identified. Using these proteins, we established an indirect ELISA for bolting McAbs. We immunized the BALB/c mice with PRRSV vaccine. After the final immunization with virus, spleen cells of mice fused with myeloma cells SP2/0 were filtered by culturing selectively, diluting finitely. As a result, an anti-Nsp2 protein McAb was obtained and named as 6B8. It is only with reaction to Nsp2F1. The ELISA titers of 6B8 supernatants and ascites were 210 and 106 respectively. In this study, firstly we successfully cloned and expressed Nsp2 gene fragments of PRRSV JXA1, secondly an anti-Nsp2 protein McAb was obtained. It is a basic research for analyzing the function of Nsp2 and establishing related diagnosis method.

Key words: PRRSV JXA1; Nsp2; McAb

中图分类号:

胡鸿惠;曹振;赵铁柱;王斌;秦亚嫚;杨璐;王传彬;陈西钊;田克恭. 高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1株Nsp2基因分段克隆表达及其单克隆抗体的制备[J]. , 2009, 36(10): 39-43.

HU Hong-hui;CAO Zhen;ZHAO Tie-zhu;WANG Bin;QIN Ya-man; YANG Lu; WANG Chuan-bin;CHEN Xi-zhao;TIAN Ke-gong. Expression and Development of Monoclonal Antibody against Nsp2 Gene Fragments of Highly Virulent PRRSV JXA1 Strain[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2009, 36(10): 39-43.

[1]	张喜懿, 温贵兰, 管国丹, 陈广, 田浪, 杨佰启. 猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州株GZ-R NSP2基因的克隆与遗传变异分析[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(11): 3659-3666.
[2]	胡荣, 白伟杰, 王治家, 孙普, 卢曾军, 李冬, 刘在新. 猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2抗原表位区的原核表达及免疫原性分析[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(6): 1796-1803.
[3]	王业华, 张欣欣, 宋庆庆, 李玉和, 宫利娜, 关平原. 猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株全基因序列比对分析[J]. 《中国畜牧兽医》---唯一指定的官方网站, 2016, 43(7): 1709-1716.
[4]	李海琴, 林娟, 刘垒, 季华员. 2013年—2014年江西地区PRRSV分离株NSP2及ORF5基因的遗传变异分析[J]. 《中国畜牧兽医》---唯一指定的官方网站, 2015, 42(9): 2254-2261.
[5]	罗成波，崔敏，孔令萍，程振涛，周碧君，毛黎红. 2株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分子特征分析[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(8): 50-56.
[6]	周思旋, 徐健, 吴屿彤, 史开志, 徐洪忠, 肖芳萍. 猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州PT分离株Nsp2基因克隆及序列变异分析[J]. , 2014, 41(10): 38-42.
[7]	唐娜, 管宇, 魏凤, 王金良, 曲光刚, 肖跃强, 李峰, 谢金文, 张松林, 张倩, 于新友, 沈志强, 柳增善. 2006—2012年鲁豫冀地区15株猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及ORF5/Nsp2基因的遗传变异分析[J]. , 2013, 40(10): 26-32.
[8]	吴忻, 韩一超, 王娟萍, 刘文俊, 姚敬明, 孟帆, 武守艳, 雷宇平, 陈剑波, 樊振华, 米瑞娟. 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒山西分离株的鉴定及部分Nsp2基因序列分析[J]. , 2012, 39(7): 47-52.
[9]	高诗敏;王敏功;邓瑞林;姚晓辉;王林川;. 猪繁殖与呼吸综合征病毒GD-ZQ变异株的分离及遗传变异分析[J]. , 2011, 38(5): 121-125.
[10]	闫东明;卢士英;任洪林;周;宫彬彬;郑鑫;杜运升;王光明;柳增善. 猪繁殖与呼吸综合征病毒流行株Nsp2基因的克隆及序列分析[J]. , 2010, 37(9): 48-51.
[11]	邓碧亮;顾万军;黄毓茂;廖明;张桂红. 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5和Nsp2基因变异分析[J]. , 2010, 37(2): 96-100.
[12]	贾怀杰;陈国华;房永祥;王晓霞;李小庆;莫斯科;瞿惠玲;;景志忠. 猪繁殖与呼吸综合征病毒JX0708株的分离鉴定及其Nsp2 基因的遗传变异分析[J]. , 2010, 37(10): 58-62.
[13]	曾晓飞;陈汉忠;韦英益;何木荣;李晓栩. 抗水牛伊氏锥虫变异表面糖蛋白抗原单克隆抗体的研制[J]. , 2009, 36(10): 72-74.