银狐生长激素cDNA克隆和原核表达

›› 2008, Vol. 1 ›› Issue (4): 26-30.

银狐生长激素cDNA克隆和原核表达

刘玉堂1，胡晓航1，3，闫丽辉2，曹殿军2，刘培欣
2，杨传平1

1.东北林业大学，哈尔滨 150040；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，哈尔滨 150001；3.黑龙江大学，哈尔滨 150080

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-04-20 发布日期:2008-04-20

Cloning and Prokaryotic Expression of Growth Hormone cDNA from Vulpes Vulpes

LIU Yu-tang1， HU Xiao-hang1，3， YAN Li-hui2
， CAO Dian-jun2，LIU Pei-xin2， YANG Chuan-ping1

1.Northeast Forestry University, Harbin 150040, China; 2.Harbin Veterinary Research Institute, CAAS, Harbin 150001, China;3.Heilongjiang University, Harbin 150080, China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2008-04-20 Published:2008-04-20

摘要/Abstract

摘要： 为了获得重组的银狐生长激素，本试验用Trizol的方法从银狐脑垂体组织中提取总RNA，以mRNA为模板，用RT-PCR方法扩增出生长激素成熟cDNA片段并克隆到载体质粒pMD18-T中；通过含有BamHⅠ酶切位点的特异引物从pMD18-T-fGH中亚克隆出cDNA片段，并将其重组到pPROEX^TMHta质粒中，构建了银狐生长激素原核表达质粒pPROEX^TMHta-fGH。将pPROEX^TMHta-fGH原核表达质粒转化DH5α大肠杆菌，用终浓度1 mmol/L IPTG进行诱导，通过SDSPAGE进行检测。结果表明在转化的大肠杆菌中检测到分子量为26 kD的fGH蛋白的存在，表达量占菌体蛋白总量的35%，并且表达产物以包涵体的形式存在。

关键词: 银狐; 生长激素; 克隆; 原核表达

Abstract: To obtain the recombinant vulpes vulpes growth hormone. The mature vulpes vulpes growth hormone mRNA obtained from pituitary was amplified by RTPCR , cloned into vector pMD18-T and subcloned into prokaryotic expression vector pPROEX^TMHta at restriction enzyme sites BamHⅠ and HindⅢ. The recombinant plasmids pMD18-TfGH cDNA and pPROEX^TMHta-fGH cDNA were identified by restriction enzyme digestion, PCR and sequencing. Then we transfer positive recombinant prokaryotic plasmid into E.Coil, and the protein was expressed under the induction of IPTG at the final concentration of 1 mmol/L. The protein expression was measured by SDS-PAGE, and a high level of fGH protein was obvserved at 26 kD which occupied about 35% of total E.coil protein. The recombined fGH protein existed in the for
m of inclusion bodies.

Key words: vulpes vulpes; growth hormone; cloning; prokaryotic expression

中图分类号:

Q785

刘玉堂;胡晓航;;闫丽辉;曹殿军;刘培欣;杨传平. 银狐生长激素cDNA克隆和原核表达[J]. , 2008, 1(4): 26-30.

LIU Yu-tang;HU Xiao-hang;;YAN Li-hui;CAO Dian-jun;LIU Pei-xin;YANG Chuan-ping. Cloning and Prokaryotic Expression of Growth Hormone cDNA from Vulpes Vulpes[J]. , 2008, 1(4): 26-30.

[1]	焦琳琳, 成玉婷, 吴庆国, 吴双, 吴植, 朱善元, 钱莺娟. 鸭坦布苏病毒Capsid蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2395-2402.
[2]	李灿, 李楚楚, 曾维, 张宁, 纪春晓, 陈韬. 猪RegⅢγ蛋白的重组表达及功能研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2414-2426.
[3]	宋越, 苏胜杰, 张帆, 白帆, 戴伶俐, 王娜, 王大伟, 杨茜雯, 赵世华, 张月梅. 溶血性曼氏杆菌截短型白细胞毒素的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2479-2486.
[4]	欧云文, 潘琴, 汪洋, 代军飞, 任绍科, 张洋, 张杰. 猪细小病毒6型ORF2基因的截短表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2487-2495.
[5]	刘佳隆, 张译文, 张悦然, 孙奇娟, 陈建, 何雷, 贾艳艳, 丁轲, 余祖华. 鸡ELAVL1基因克隆、原核表达及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1807-1817.
[6]	张芳源, 蔺雅婷, 杨大为, 陈虎, 李桂梅, 单虎. 非洲猪瘟病毒P30蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2012-2022.
[7]	王雪平, 张孝俊, 李晓月, 王国栋, 张福良, 宋玉伟, 张明亮, 马磊. 高致病性禽腺病毒血清4型Hexon蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2053-2060.
[8]	范冰峰, 李文, 刘理想, 赵向远, 邵静, 林乐丰, 孙慧敏, 张旭林, 许保增. 水貂AANAT基因克隆及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1307-1318.
[9]	刘红润, 朱思燃, 奉玲丽, 张坤, 颜港, 王钰滨, 张帅, 江山, 许迪, 兰干球, 梁晶. 大白猪CDO1基因克隆、生物信息学分析及组织表达定位[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1352-1363.
[10]	胡乐玉, 胡欣瑶, 李颖, 赵盛淼, 沈凤臻, 王长法, 李亮亮, 王彤彤, 任慧英. 德州驴HO-1基因生物信息学分析及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1499-1510.
[11]	王文婕, 茹鹏辉, 郁川, 杜付熙, 陈松彪, 尚珂, 张春杰, 程相朝. 猫细小病毒洛阳分离株VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1511-1521.
[12]	刘家兴, 韩雪英, 张鑫茹, 邓嘉昕, 姚伦广, 刘阳坤. 携带猪流行性腹泻病毒抗原表位的铁蛋白纳米颗粒制备与免疫原性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1567-1574.
[13]	贾新月, 马静, 张艳艳, 马勋, 王正荣, 薄新文. 细粒棘球绦虫EGR-07243和EGR-07244基因生物信息学分析及原核表达[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 847-858.
[14]	张永杰, 隋志远, 张志帅, 王晨光, 李孝君, 邢凤. 多浪羊NPTX1基因克隆、生物信息学分析及在初情期的表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1048-1058.
[15]	章志涛, 李祥龙, 孔令丽, 罗雨昕, 王冬英. 大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A的原核表达及不同时期表达水平分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1107-1117.