内江猪γ干扰素基因的克隆、序列分析及真核表达载体的构建

›› 2007, Vol. 34 ›› Issue (5): 60-63.

内江猪γ干扰素基因的克隆、序列分析及真核表达载体的构建

黄亚平，郭万柱,李晓琪

四川农业大学动物生物技术中心，雅安 625014

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-05-20 发布日期:2007-05-20

Molecular Cloning， Sequencing and Constructing Eukaryotic Expression Vector of Neijiang Pig IFN-γ

HUANG Yaping, GUO Wanzhu,LI Xiaoqi

The Center of Animal Biotechnology, Sichuan Agriculture Univerisity，Yaan 625014，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2007-05-20 Published:2007-05-20

摘要/Abstract

摘要： 将内江猪的外周血淋巴细胞在刀豆素（ConA）的刺激下培养24 h后，提取总RNA,应用一步法RT-PCR扩增γ干扰素（IFN-γ）cDNA,克隆到PMD18-T载体，命名为pMD-N-IFN-γ，测序结果证明克隆的cDNA全长603 bp，其ORF为501 bp，编码166个氨基酸，与Genbank公布的IFN-γ比对，核苷酸同源性在99.4%以上，从而证实成功地克隆了内江猪IFN-γ基因。以pMD-N-IFN-γ质粒为模板亚克隆完整ORF区,连接到真核表达质粒pcDNA3.1(+)的EcoRI、XhoI两位点之间，经单双酶切鉴定，成功的构建了IFN-γ真核表达载体pcDNA3.1(+)-N-IFN-γs。

关键词: γ干扰素; 克隆; 序列分析; 真核表达载体构建

Abstract: Total RNA was isolated from neijiang pig peripheral blood lymphocytes which were stimulated with ConA. Then the pIFN-γ cDNA was amplified by reverse transcription polymerase chain reaction. The amplified fragment was cloned into vector pMD18-T named pMD-N-IFN-γ and then sequenced. It was found that the amplified fragment was consisted of 603 nucleotides, the ORF consisted of 501 nucleotides, encoding 166 amino acids, Neijang pig IFN-γ gene has more than 99.4% homology with other pigs on Genbank. Subcloning the ORF of pig IFN-γ gene， then the sub-cloned gene was successfully inserted between EcoRI and XhoI site of the eukaryotic expression vector pcDNA3.1(+)， named pcDNA3.1(+)-N-IFN-γs.

Key words: IFN-γ; cloning; sequencing; constructing eukaryotic expression vector

中图分类号:

Q785

黄亚平;郭万柱;李晓琪. 内江猪γ干扰素基因的克隆、序列分析及真核表达载体的构建[J]. , 2007, 34(5): 60-63.

HUANG Yaping;GUO Wanzhu;LI Xiaoqi. Molecular Cloning， Sequencing and Constructing Eukaryotic Expression Vector of Neijiang Pig IFN-γ[J]. , 2007, 34(5): 60-63.

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