广西巴马小型猪卵泡抑素的克隆及原核表达

›› 2007, Vol. 34 ›› Issue (10): 49-52.

广西巴马小型猪卵泡抑素的克隆及原核表达

莫毅1，郭亚芬1，梁方方2，兰干球1，蒋和生1，李柏1

1.广西大学动物科学技术学院，南宁 530004；2.广西畜牧研究所，南宁 530001

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-10-20 发布日期:2007-10-20

Cloning and Prokaryotic Expression of Follistatin Gene fromthe Guangxi Bama Mini-pig

MO Yi1,GUO Yafen1,LIANG Fangfang2,LAN Ganqiu
1,JIANG Hesheng1,LI Bai1

1.College of Animal Science and Technology，Guangxi University，Nanning 530004,China； 2.Guangxi Institute of Animal Science, Nanning 530001,China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2007-10-20 Published:2007-10-20

摘要/Abstract

摘要： 从广西大学巴马小型猪卵巢中提取总RNA，并以其为模板，应用逆转录-聚合酶链式反
应（RT-PCR），在合成的特异性引物引导下，扩增获得广西巴马小型猪卵泡抑素（follist
atin）cDNA的全序列，长度为1035 bp。将PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行序列测定及分析，结果表明：广西巴马小型猪卵泡抑素cDNA序列与GenBank中已报道的家猪卵泡抑素同源性高达99.4%。同时，将目的基因插入到原核表达载体pET 32a+多克隆位点中，构建了follistatin的原核表达载体，并转化于大肠杆菌BL21。转化菌经异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质免疫印迹（Western blotting）分析，结果表明：试验已成功表达了follistatin的融合蛋白(约58.4 ku)。

关键词: 广西巴马小型猪; 卵泡抑素; 克隆; 原核表达

Abstract: In this study, the total RNA was isolated from Guangxi Bama mini-pig
ovary tissue with RNAwatson extraction. The complementary DNA (cDNA) encoding follistatin protein was ampilified by the reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) method and a pair of differential primers. The amplified cDNA fragment was inserted into pMD18-T vector. The recombined vectors were verified through the sequence survey. The results showed that the cloned follistatin cDNA was highly homologous with the reported nucleotide encoding swine follistatin in GenBank(99.4%). Meanwhile, the identified follistatin cDNA was inserted in the multiple cloning sites of plasmid pET 32a+ to construct prokaryotic expression vector, the latter was transformed into the E coli BL21 induced by IPTG. Then a fusion protein was obtained (about 58.4 ku) in SDSPAGE and Western blotting.These results showed that the follistatin cDNA was expressed in prokaryotic cells.

Key words: Guangxi Bama mini-pig; follistatin; cloning; prokaryotic expression

中图分类号:

Q786

莫毅;郭亚芬;梁方方;兰干球;蒋和生;李柏. 广西巴马小型猪卵泡抑素的克隆及原核表达[J]. , 2007, 34(10): 49-52.

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