猪瘟病毒NS3蛋白ATPase/RNA解旋酶功能区的表达与纯化

›› 2007, Vol. 34 ›› Issue (10): 43-46.

猪瘟病毒NS3蛋白ATPase/RNA解旋酶功能区的表达与纯化

郑杰1，2，宁宜宝2

1.中国农业大学动物医学院国家动物海绵状脑病实验室，北京 100094；2.中国兽医药品监察所，北京 100081

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-10-20 发布日期:2007-10-20

Cloning Expression,Purification of Partial ATPase/RNA Helicase Functional Domain of NS3 Genes of Classical Swine Fever Virus

ZHENG Jie1,2,NING Yibao2

1.National Animal Transmissible Spongiform Encephalopathies Laboratory, College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100094,China;2.National Classical Swine Fever Reference Laboratory,China Institute of Veterinary Drug Control, Beijing 100081,China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2007-10-20 Published:2007-10-20

摘要/Abstract

摘要： 采用RT-PCR 技术扩增出猪瘟病毒石门株和C株NS3基因的ATPase/RNA解旋酶功能区,将其克隆到表达载体pET-28a(+) 中,获得重组质粒pET-NS3SM和pET-NS3C；PCR、酶切鉴定和序列分析结果表明目的基因插入位置、方向和读码框完全正确；0.8 mmol/L IPTG诱导得到分子量为54kD 的目的蛋白,Western blotting结果表明,表达的目的蛋白与猪瘟高免血清没有出现肉眼可见的反应；通过ELISA试验结果表明，重组蛋白能被CSFV 阳性血清识别。

关键词: 猪瘟病毒; NS3基因; ATPase/RNA解旋酶; 克隆; 表达

Abstract: Partial ATPase/RNA helicase functional domain of NS3 genes of CSFV SHIMEN rain and C rain were amplified by RT-PCR;The recombinant plasmids pET-N
S3 SMand p ET-NS3C were obtained after being cloned them into expression vector pET-28a(+); And then the 54 kD target proteins were produced by inducing with 0.8 mmol/L IPTG;Western blotting showed that the expressed proteins couldn't be recognized by superserum against csfv.And ELISA showed that the expressed proteins could be recognized by superserum against csfv.

Key words: classical swine fever virus(CSFV); NS3 gene; ATPase/RNA helicase; cloning; expression

中图分类号:

S852.65+1

郑杰;宁宜宝. 猪瘟病毒NS3蛋白ATPase/RNA解旋酶功能区的表达与纯化[J]. , 2007, 34(10): 43-46.

ZHENG Jie;NING Yibao. Cloning Expression,Purification of Partial ATPase/RNA Helicase Functional Domain of NS3 Genes of Classical Swine Fever Virus[J]. , 2007, 34(10): 43-46.

[1]	焦琳琳, 成玉婷, 吴庆国, 吴双, 吴植, 朱善元, 钱莺娟. 鸭坦布苏病毒Capsid蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2395-2402.
[2]	欧云文, 潘琴, 汪洋, 代军飞, 任绍科, 张洋, 张杰. 猪细小病毒6型ORF2基因的截短表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2487-2495.
[3]	刘佳隆, 张译文, 张悦然, 孙奇娟, 陈建, 何雷, 贾艳艳, 丁轲, 余祖华. 鸡ELAVL1基因克隆、原核表达及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1807-1817.
[4]	张芳源, 蔺雅婷, 杨大为, 陈虎, 李桂梅, 单虎. 非洲猪瘟病毒P30蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2012-2022.
[5]	王雪平, 张孝俊, 李晓月, 王国栋, 张福良, 宋玉伟, 张明亮, 马磊. 高致病性禽腺病毒血清4型Hexon蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2053-2060.
[6]	范冰峰, 李文, 刘理想, 赵向远, 邵静, 林乐丰, 孙慧敏, 张旭林, 许保增. 水貂AANAT基因克隆及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1307-1318.
[7]	刘红润, 朱思燃, 奉玲丽, 张坤, 颜港, 王钰滨, 张帅, 江山, 许迪, 兰干球, 梁晶. 大白猪CDO1基因克隆、生物信息学分析及组织表达定位[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1352-1363.
[8]	胡乐玉, 胡欣瑶, 李颖, 赵盛淼, 沈凤臻, 王长法, 李亮亮, 王彤彤, 任慧英. 德州驴HO-1基因生物信息学分析及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1499-1510.
[9]	王文婕, 茹鹏辉, 郁川, 杜付熙, 陈松彪, 尚珂, 张春杰, 程相朝. 猫细小病毒洛阳分离株VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1511-1521.
[10]	张永杰, 隋志远, 张志帅, 王晨光, 李孝君, 邢凤. 多浪羊NPTX1基因克隆、生物信息学分析及在初情期的表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1048-1058.
[11]	牛小杰, 徐明国, 肖莉, 刘文豪, 陈创夫, 王勇. 鸡白痢沙门氏菌IPAJ蛋白的表达纯化、多克隆抗体制备及ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1218-1228.
[12]	侯浩宇, 郑南南, 吴宏举, 陈寅龙, 李潮, 张昂克, 姬鹏超, 万博, 杜永坤, 张改平. 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备和鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1241-1249.
[13]	韦义荣, 郑自华, 张叁保, 宋颖, 蒋海玉, 孙雯玥, 程鹏飞, 刘雨帆, 邹剑伟, 黄艳娜, 潘艳, 蒋钦杨. 努比亚山羊UCP1基因克隆、生物信息学分析及组织表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 440-450.
[14]	李朋霏, 宋晓明, 周保琨, 曹志, 张洪亮, 马清霞, 单虎. 用于非洲猪瘟病毒核酸检测的假病毒阳性对照品的制备和标定[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 647-655.
[15]	吕双飞, 马勋, 王静, 孔翠莲, 寇丽君, 刘彩霞, 史唯地, 康立超, 任慧杰. 炭疽芽孢杆菌PA-LF1融合蛋白的原核表达及其反应原性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 674-683.