新型鸭呼肠孤病毒σB蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.12.010

《中国畜牧兽医》 ›› 2016, Vol. 43 ›› Issue (12): 3149-3155.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.12.010

新型鸭呼肠孤病毒σB蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备

梅敏敏, 梁国智, 黄雯晶, 李晓文, 黄淑坚

佛山科学技术学院生命科学学院, 佛山 528231

收稿日期:2016-05-23 出版日期:2016-12-20 发布日期:2016-12-22
通讯作者: 黄淑坚 E-mail:sjhuang.foshan@163.com
作者简介:梅敏敏(1993-),女,湖南郴州人,硕士,研究方向:禽传染病学,E-mail:15899840301@163.com
基金资助:
广东省家禽重大传染病控制技术研究（2012A020100001）

Prokaryotic Expression and Polyclonal Antibody Preparation of σB Protein of New-type Duck Reovirus

MEI Min-min, LIANG Guo-zhi, HUANG Wen-jing, LI Xiao-wen, HUANG Shu-jian

College of Life Science, Foshan University, Foshan 528231, China

Received:2016-05-23 Online:2016-12-20 Published:2016-12-22

摘要/Abstract

摘要：

为制备新型鸭呼肠孤病毒（new-type duck reovirus，NDRV）XX株σB蛋白的多克隆抗体，试验经RT-PCR扩增NDRV XX株σB基因编码序列，构建原核表达质粒pET-32a（+）-σB，将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞后，经IPTG诱导获得His-σB重组蛋白。SDS-PAGE显示成功表达出约55 ku的融合蛋白，主要以包涵体形式存在，其表达时的最佳诱导时间、IPTG诱导浓度分别为3 h和0.25 mmol/L。经Ni²⁺柱亲和层析纯化获得可溶性重组蛋白，将蛋白经Western blotting和蛋白质谱鉴定为高纯度的σB重组蛋白，将纯化后σB重组蛋白按合理免疫程序免疫家兔，获得多抗隆抗体经Western blotting分析显示出特异性的反应。本试验结果为NDRV σB蛋白功能的深入研究及基因工程疫苗的研发奠定了基础。

关键词: 新型鸭呼肠孤病毒; σB蛋白; 原核表达; 多克隆抗体

Abstract:

To prepare polyclonal antibodies against σB protein of new-type duck reovirus (NDRV) XX strain, the encoding sequence of σB gene of NDRV XX strain was amplified by RT-PCR and successfully inserted to expression plasmid pET-32a(+), and transformed in Escherichia coli BL21(DE3). The His-σB recombinant protein was achieved with IPTG induction. SDS-PAGE result showed that the molecular weight of the expression on fusion protein was about 55 ku, was major insoluble fractions. IPTG induced time and concentration were 3 h and 0.25 mmol/L, respectively. The soluble σB recombinant protein was highly purified which was purified using Ni²⁺ affinity chromatography and verified by Western blotting and protein mass spectrometry. Then the polyclonal antibodies could be obtained from the rabbits which had immunized by the purified σB recombinant protein with the reasonable procedure. The Western blotting result showed that they had the specific reaction. The results built a foundation of the further study of the NDRV σB protein function and the research of genetic engineering vaccine.

Key words: new-type duck reovirus; σB protein; prokaryotic expression; polyclonal antibody

中图分类号:

S852.65⁺9.4

梅敏敏, 梁国智, 黄雯晶, 李晓文, 黄淑坚. 新型鸭呼肠孤病毒σB蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备[J]. 《中国畜牧兽医》, 2016, 43(12): 3149-3155.

MEI Min-min, LIANG Guo-zhi, HUANG Wen-jing, LI Xiao-wen, HUANG Shu-jian. Prokaryotic Expression and Polyclonal Antibody Preparation of σB Protein of New-type Duck Reovirus[J]. , 2016, 43(12): 3149-3155.

参考文献

[1] 马超英. 禽肠孤病毒与禽白血病病毒双重RT-PCR检测方法的建立和应用[J]. 中国畜牧兽医, 2013,40(2):53-56.
[2] Heffels-Redmann U, Muller H, Kaleta E F. Structural and biological characteristics of reoviruses isolated from Muscovy ducks (Cairina moschata)[J]. Avian Pathology, 1992, 21(3):481-491.
[3] Malkinson M, Perk K, Weisman Y. Reovirus infection of young Muscovy ducks (Cairina moschata)[J]. Avian Pathology, 1981, 10(4):433-440.
[4] Ni Y, Kemp M C. A comparative study of avian reovirus pathogenicity:Virus spread and replication and induction of lesions[J]. Avian Diseases, 1995, 39(3):554-566.
[5] 袁远华, 吴志新, 黄兴国, 等. 新型鸭呼肠孤病毒病研究进展[J]. 养禽与禽病防治, 2012,10:18-420.
[6] 卿柯香,袁远华,郭霄峰,等. NDRV和MDRV双重RT-PCR检测方法的建立[J]. 中国兽医杂志, 2014,4:12-15.
[7] 陈少莺, 陈仕龙, 林锋强, 等. 一种新的鸭病(暂名鸭出血性坏死性肝炎)病原学研究初报[J]. 中国农学通报, 2009,25(16):28-31.
[8] 袁远华,王俊峰,吴志新,等.1株番鸭源新型鸭呼肠孤病毒(QY株)生物学鉴定[J]. 中国兽医学报, 2013,8:1174-1178.
[9] Wang S, Chen S L, Cheng X X, et al. Sequence and phylogenetic analysis of M-class genome segments of novel duck reovirus NP03[J]. Can J Vet Res,2015, 79(2):147-150.
[10] Yun T,Yu B,Ni Z, et al. Genomic characteristics of a novel reovirus from Muscovy duckling in China[J]. Vet Microbiol,2014, 168(2-4):261-271.
[11] Chen Z L,Luo G F,Wang Q X, et al. Muscovy duck reovirus infection rapidly activates host innate immune signaling and induces an effective antiviral immune response involving critical interferons[J].Vet Microbiol, 2014, 175(2-4):232-243.
[12] Liu H J, Le L H, Hu H W, et al. Molecular evolution of avian reovirus:Evidence for genetic diversity and reassortment of the S-class genome segments and multiple cocirculating lineages[J]. Virology, 2003, 314(1):336-349.
[13] Zhu Y Q, Li C F, Bi Z L,et al. Protective immune responses in ducklings induced by a suicidal DNA vaccine of the sigma C gene of novel duck reovirus[J].Vet Immunol Immunopathol, 2015, 165(1-2):88-92.
[14] 王全溪. 番鸭呼肠孤病毒诊断技术研究[D].福州:福建农林大学, 2004.
[15] 孙陈莉. 检测致产蛋下降的鸭呼肠孤病毒抗原或抗体的ELISA方法的建立[D]. 扬州:扬州大学, 2013.
[16] Yin C H, Qin L T, Sun M Y, et al. Antigenic analysis of monoclonal antibodies against different epitopes of σB protein of avian reovirus[J]. PLoS One, 2003,8(11):e81533.
[17] 陈海鹏. 新型番鸭呼肠孤病毒σC蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立及应用[D]. 泰安:山东农业大学, 2014.
[18] 毕庄莉,朱英奇,陈宗艳,等. 新型鸭呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备[J]. 浙江农业学报, 2015,45(5):882-886.
[19] 朱二鹏,崔龙萍,吕小婷,等. 番鸭呼肠孤病毒σNS蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备[J]. 中国兽医科学,2014,26(4):474-480.
[20] 陈爱春, 彭伟, 汪生鹏. 亲和标签在重组蛋白表达与纯化中的应用[J]. 中国生物工程杂志, 2012,12:93-103.

新型鸭呼肠孤病毒σB蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备

Prokaryotic Expression and Polyclonal Antibody Preparation of σB Protein of New-type Duck Reovirus

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	焦琳琳, 成玉婷, 吴庆国, 吴双, 吴植, 朱善元, 钱莺娟. 鸭坦布苏病毒Capsid蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2395-2402.
[2]	李灿, 李楚楚, 曾维, 张宁, 纪春晓, 陈韬. 猪RegⅢγ蛋白的重组表达及功能研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2414-2426.
[3]	宋越, 苏胜杰, 张帆, 白帆, 戴伶俐, 王娜, 王大伟, 杨茜雯, 赵世华, 张月梅. 溶血性曼氏杆菌截短型白细胞毒素的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2479-2486.
[4]	欧云文, 潘琴, 汪洋, 代军飞, 任绍科, 张洋, 张杰. 猪细小病毒6型ORF2基因的截短表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2487-2495.
[5]	张芳源, 蔺雅婷, 杨大为, 陈虎, 李桂梅, 单虎. 非洲猪瘟病毒P30蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2012-2022.
[6]	王雪平, 张孝俊, 李晓月, 王国栋, 张福良, 宋玉伟, 张明亮, 马磊. 高致病性禽腺病毒血清4型Hexon蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2053-2060.
[7]	胡乐玉, 胡欣瑶, 李颖, 赵盛淼, 沈凤臻, 王长法, 李亮亮, 王彤彤, 任慧英. 德州驴HO-1基因生物信息学分析及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1499-1510.
[8]	王文婕, 茹鹏辉, 郁川, 杜付熙, 陈松彪, 尚珂, 张春杰, 程相朝. 猫细小病毒洛阳分离株VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1511-1521.
[9]	刘家兴, 韩雪英, 张鑫茹, 邓嘉昕, 姚伦广, 刘阳坤. 携带猪流行性腹泻病毒抗原表位的铁蛋白纳米颗粒制备与免疫原性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1567-1574.
[10]	贾新月, 马静, 张艳艳, 马勋, 王正荣, 薄新文. 细粒棘球绦虫EGR-07243和EGR-07244基因生物信息学分析及原核表达[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 847-858.
[11]	章志涛, 李祥龙, 孔令丽, 罗雨昕, 王冬英. 大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A的原核表达及不同时期表达水平分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1107-1117.
[12]	牛小杰, 徐明国, 肖莉, 刘文豪, 陈创夫, 王勇. 鸡白痢沙门氏菌IPAJ蛋白的表达纯化、多克隆抗体制备及ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1218-1228.
[13]	甘露, 郑会珍, 诺明达来, 刘燕, 金敏, 何文文, 温丽翠, 李永畅, 巴音查汗·盖力克. 伊氏锥虫伊犁株扩繁及其PFR基因克隆表达和生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 469-478.
[14]	吕双飞, 马勋, 王静, 孔翠莲, 寇丽君, 刘彩霞, 史唯地, 康立超, 任慧杰. 炭疽芽孢杆菌PA-LF1融合蛋白的原核表达及其反应原性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 674-683.
[15]	张凯, 张春平, 戈胜强, 孙春喜, 程杰, 伏春雨, 王刚, 牛星, 彭军. 非洲猪瘟病毒p22蛋白表达、多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 270-279.